EGFR信號(hào)通路對(duì)膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：EGFR信號(hào)通路對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系GL15增殖的調(diào)控作用 目的探討EGFR信號(hào)通路對(duì)于人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系GL-15細(xì)胞增殖及PCNA表達(dá)的影響。方法應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)GL15細(xì)胞，免疫組化法檢測(cè)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)、EGFR表達(dá)情況，細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)不同濃度的EGF對(duì)于膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響，分別運(yùn)用免疫組化法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度EGF作用后PCNA表達(dá)情況

2、。結(jié)果GFAP在GL15細(xì)胞呈散在表達(dá)，EGFR明顯的高表達(dá)；劑量小于等于lng/ml的EGF對(duì)于膠質(zhì)瘤細(xì)胞有促增殖作用，與對(duì)照組相比，細(xì)胞數(shù)目明顯增加，EGF作用后細(xì)胞核PCNA的表達(dá)明顯增加；而10ng/ml、100ng/ml的EGF對(duì)于膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，PCNA的表達(dá)明顯減少。結(jié)論GL15細(xì)胞為典型的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，EGFR信號(hào)通路對(duì)于膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)影響具有雙相調(diào)控作用，小劑量EGF可促進(jìn)細(xì)胞增生，大劑量EGF可抑制

3、細(xì)胞生長(zhǎng)。 第二部分：EGFR信號(hào)通路對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系GL15增殖雙相調(diào)控的分子機(jī)制 目的探討EGFR信號(hào)通路對(duì)于人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系GL-15細(xì)胞細(xì)胞周期及及細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的影響。方法以不同濃度的EGF處理GL15細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡率的改變，激光掃描共聚焦顯微鏡(1aserscanconfocalmicroscope，LSCM)檢測(cè)EGF對(duì)于細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響。結(jié)果0.1ng/ml、1ng/mlEGF作用

4、后，與對(duì)照組相比，G0/G1期細(xì)胞比例明顯下降，S期比例增加，10ng/ml、100ng/mlEGF作用以后均出現(xiàn)明顯的亞G1峰，細(xì)胞凋亡率明顯升高，EGF可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的增加，但大劑量EGF組誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)鈣升高的輻度明顯高于小劑量組。結(jié)論小劑量的EGF有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞由靜止期轉(zhuǎn)入DNA合成期的作用，大劑量EGF能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并導(dǎo)致細(xì)胞的增殖受抑制，EGFR信號(hào)通路的差異性調(diào)控可能與細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的差異有關(guān)。 第三部

5、分：轉(zhuǎn)染LRIG1基因?qū)τ谀z質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的影響 目的探討LRIG1基因?qū)τ谀z質(zhì)瘤細(xì)胞系GL15增殖及EGFR信號(hào)通路的影響，為膠質(zhì)瘤發(fā)生機(jī)制的研究和基因治療提供理論依據(jù)。方法采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將LRIG1-EGFP真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到GL15細(xì)胞系中，了解其對(duì)細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞周期的影響，應(yīng)用共聚焦顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染后對(duì)EGF引起的細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的變化情況。結(jié)果轉(zhuǎn)染LRIG1基因能抑制EGF引起的細(xì)胞生長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞周期分析表