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文檔簡介
1、背景:膠質瘤耐藥問題至今仍是膠質瘤治療中亟待解決的難題,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在膠質瘤中存在少量的膠質瘤干細胞,在腫瘤遷徙和侵襲性中發(fā)揮關鍵作用,是膠質瘤復發(fā)和治療抗性的根源。以腫瘤干細胞作為研究對象,對闡明腦腫瘤發(fā)生發(fā)展機制有重要的價值。表皮生長因子受體(EGFR)是一種具酪氨酸激酶活性的跨膜受體,哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是胞漿中一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,細胞中EGFR及mTOR兩信號通路對于細胞增殖,細胞周期都有重要作用。將兩者聯(lián)合應用于
2、膠質瘤及膠質瘤干細胞的作用如何卻鮮有報道。
目的:在細胞水平研究埃羅替尼(Erlotinib)和雷帕霉素(Rapamycin)單獨及聯(lián)合用藥對腦膠質瘤C6細胞及其腫瘤干細胞(GSCs)的增殖、周期的作用,和細胞內EGFR和mTOR信號通路中基因及蛋白表達情況,探討及驗證埃羅替尼、雷帕霉素聯(lián)合抑制膠質瘤細胞增殖、細胞周期及轉移的可能機制,為膠質瘤靶向治療提供新的研究切入點。
方法:采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)C6細胞,
3、獲取C6膠質瘤干細胞(GSCs),細胞免疫熒光染色檢測CD133和nestin鑒定膠質瘤干細胞;采用CCK-8、RT-PCR和Westernblot技術檢測經埃羅替尼、雷帕霉素干預后,腫瘤細胞、膠質瘤干細胞的細胞增殖和細胞周期與EGFR和mTOR信號通路相關基因蛋白EGFR、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、rps6k、p-rps6k表達變化的關系。
結果:膠質瘤干細胞表達CD133、Nestin;埃羅替尼、雷帕
4、霉素對C6及C6膠質瘤干細胞均呈劑量-時間依賴性抗增殖作用(P<0.05),兩者聯(lián)合用藥抗增殖效果更加明顯。埃羅替尼與雷帕霉素能夠增加G1期細胞比例,減少S期比例,但C6膠質瘤干細胞對埃羅替尼、雷帕霉素的敏感性低于C6細胞(P<0.05);用藥組與空白組相比,細胞中EGFR和mTOR通路中相關蛋白表達明顯下調(P<0.05),聯(lián)合用藥組效果更明顯。
結論:膠質瘤C6細胞系中存在一定的腫瘤干細胞;埃羅替尼與雷帕霉素通過阻斷E
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