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簡介:第一部分乙酰膽堿酯酶活性的PET顯像劑11CMP4A的制備目的合成能反映腦乙酰膽堿酯酶活性的PET顯像劑11C4乙酰氧基N甲基哌啶11CMP4A的前體4乙酰氧基哌啶P4A制備11CMP4A。方法合成前體P4A。利用11C碘代甲烷合成模塊合成的11C碘代甲烷11CCH3I直接與P4A反應(yīng)制備11CMP4A或?qū)?1CCH3I通過三氟甲基磺酸銀柱轉(zhuǎn)化為11C三氟甲基磺酸甲烷11CTRIFLATECH4后再與P4A反應(yīng)制備11CMP4A。結(jié)果P4A化學(xué)純度達(dá)99%以上。采用11CTRIFLATECH3制備的11CMP4A放化純>98%轟擊結(jié)束后EOB放射合成時(shí)間為20分鐘校正衰變后產(chǎn)率為40%55%。結(jié)論采用11CTRIFLATECH3制備的11CMP4A放化純度高產(chǎn)率高。第二部分腦乙酰膽堿酯酶活性的PET顯像劑11CMP4A在大鼠體內(nèi)分布的研究目的研究腦乙酰膽堿酯酶活性的正電子斷層掃描PET診斷顯像劑11C4乙酰氧基N甲基哌啶11CMP4A在大鼠體內(nèi)的攝取和分布。方法正常雌性SD大鼠按注射后5、15、25、35、45、60分鐘時(shí)間點(diǎn)分組尾靜脈注射11CMP4A后斷頭處死動(dòng)物迅速取血分離臟器和腦大腦皮層、小腦和腦干用自動(dòng)Γ放射性計(jì)數(shù)儀測定11C計(jì)數(shù)后稱重。計(jì)算經(jīng)衰變校正后不同時(shí)間點(diǎn)各臟器放射性攝取率以%IDG表示。結(jié)果一次劑量的11CMP4A靜脈注射后血中的放射性活性在5分鐘時(shí)%IDG為1344±188清除迅速60分鐘時(shí)接近于基線水平。各臟器組織11CMP4A的攝取1525分鐘達(dá)到穩(wěn)態(tài)。注射11CMP4A5分鐘時(shí)大腦皮層放射性活性%IDG為226±029。腦內(nèi)各區(qū)域的攝取在注射后1525分鐘達(dá)到穩(wěn)態(tài)。皮層的平均%IDG大于小腦兩者比值范圍為113208。60分鐘時(shí)小腦、腦干和皮層的%IDG與其最高峰攝取的%IDG相比分別下降了77%、8096和40%皮層放射活清除最慢。結(jié)論11CMP4A血中清除迅速。腦中各區(qū)域攝取在短時(shí)達(dá)到穩(wěn)態(tài)提示11CMP4A有較好的脂溶性透過血腦屏障。皮層攝取相對小腦高清除慢因此11CMP4A能更好反映皮層乙酰膽堿酯酶活性適合作為腦乙酰膽堿酯酶活性的PET診斷顯像劑。第三部分11CMP4A的臨床前評估PET活體顯像轉(zhuǎn)基因癡呆小鼠、老齡小鼠及獼猴的腦乙酰膽堿酯酶活性目的用腦乙酰膽堿酯酶活性的正電子斷層掃描PET診斷顯像劑11C4乙酰氧基N甲基哌啶11CMP4A對轉(zhuǎn)基因癡呆小鼠、老齡小鼠及獼猴進(jìn)行活體PET顯像研究。方法小鼠于尾靜脈注射11CMP4A后腹腔內(nèi)麻醉小鼠獼猴經(jīng)一側(cè)肘靜脈麻醉后于另側(cè)肘靜脈靜脈注射11CMP4A。固定試驗(yàn)動(dòng)物于掃描床進(jìn)行PETCT掃描并采集圖像。測量各感興趣區(qū)域放射性濃度計(jì)算各感興趣區(qū)域放射總量占全身放射總量的百分比值用%ID表示比較兩組小鼠間及獼猴的PET顯像特點(diǎn)。掃描結(jié)束后將小鼠斷頭處死分離腦大腦、小腦和腦干測定11C計(jì)數(shù)后稱重。計(jì)算放射性攝取率用%IDG表示比較兩組小鼠腦放射性攝取分布特點(diǎn)。結(jié)果PET掃描圖像顯示兩組小鼠腦放射性聚集均對稱分布轉(zhuǎn)基因癡呆鼠腦中放射性聚集較老齡鼠稀疏。轉(zhuǎn)基因小鼠大腦放射性活性平均%IDG值為149老齡鼠大腦平均%IDG值為262P0025兩組差別有意義。獼猴11CMP4A顯像腦內(nèi)皮層下攝取最明顯對稱分布皮層也有中等度放射聚集放射顯像清晰。結(jié)論11C肝4A在小鼠和正常獼猴腦放射顯像圖像清晰對稱分布濃聚于皮層下與腦乙酰膽堿酯酶活性的組化分布一致。11CMP4APET可以活體顯像腦乙酰膽堿酯酶的活性。
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簡介:,中圖分類號UDC學(xué)校代碼10055密級公開蠱恐犬淫碩士學(xué)位論文GEOBACILLUSTHERMODENITRILTCANSNG802學(xué)科專業(yè)生物絲堂皇盆王生物堂研究方向蛋自廈王捏改造南開大學(xué)研究生院二。一一年五月南開大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本學(xué)位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名閨江2011年5月25ET非公開學(xué)位論文標(biāo)注說明根據(jù)南開大學(xué)有關(guān)規(guī)定,非公開學(xué)位論文須經(jīng)指導(dǎo)教師同意、作者本人申請和相關(guān)部門批準(zhǔn)方能標(biāo)注。未經(jīng)批準(zhǔn)的均為公開學(xué)位論文,公開學(xué)位論文本說明為空白。論文題目申請密級口限制≤2年口秘密≤10年口機(jī)密≤20年保密期限20審批表編號年月日至20年月日批準(zhǔn)日期20年月日限制★2年最長2年,可少于2年秘密★L(fēng)O年最長5年,可少于5年機(jī)密★20年最長10年,可少于10年
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簡介:ECOLIO157H7和沙門氏菌是牛羊等反芻動(dòng)物無癥狀攜帶的、嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全的人畜共患病致病菌。然而,由于較短的肉牛產(chǎn)業(yè)歷史和不同的飲食習(xí)慣,作為世界牛肉大國的中國未見有關(guān)于宰前動(dòng)物糞便和皮毛帶菌量、屠宰過程中ECOLIO157H7和沙門氏菌污染情況的研究報(bào)道。本課題的目的在于研究屠宰過程中ECOLIO157H7和沙門氏菌的流行分布情況,評估屠宰加工過程中上述兩種致病菌可能存在的易感環(huán)節(jié),為HACCP關(guān)鍵點(diǎn)的制定提供理論依據(jù);通過對調(diào)查環(huán)節(jié)分離出的ECOLIO157H7和沙門氏菌進(jìn)行毒力基因及耐藥性分析,確定我國牛源ECOLIO157H7的毒性及沙門氏菌的血清型和耐藥性。本研究的主要結(jié)果如下通過對4個(gè)肉牛屠宰廠7個(gè)取樣點(diǎn)糞便、皮毛、去皮后、去臟后、噴淋后、排酸后、分割后510個(gè)樣品的檢測,從36份樣品中分離到沙門氏菌71%,3份樣品中分離到ECOLIO157H706%。對于沙門氏菌,7個(gè)取樣點(diǎn)的陽性檢出率分別為200%,171%,14%,29%,29%,25%和38%。ECOLIO157H7僅在糞便、皮毛、排酸后樣品中檢出,檢出率分別為14%,14%,13%。屠宰過程的不同工序中,去皮后樣品沙門氏菌檢出率顯著降低,其他工序沙門氏菌的檢出率沒有顯著差異。不同地域沙門氏菌流行率存在差異,工廠A的沙門檢出率156%顯著高于其它工廠的檢出率P采用PCR法對ECOLIO157H7分離菌株進(jìn)行毒力基因檢測,7株分離菌株都檢測到STX2、EAE、RFBEO157、FLICH7、HLYA基因的存在。應(yīng)用PCR對80株沙門氏菌INVA基因進(jìn)行檢測,所有菌株都擴(kuò)增得到了284BP的目的條帶。隨機(jī)抽取部分沙門氏菌分離菌株進(jìn)行血清分型研究,結(jié)果顯示,18株沙門氏菌的血清型分別為火雞沙門氏菌SMELEAGRIDIS,444%、德爾卑沙門氏菌SDERBY,444%、科特布斯沙門氏菌SKOTTBUS,111%。采用KIRBYBAUER法分析沙門氏菌分離菌株對抗生素的敏感特性,在58株沙門氏菌分離菌株中,69%的沙門氏菌對四環(huán)素中介;34%沙門氏菌對氨芐西林、頭孢噻吩、鏈霉素中介;17%的沙門氏菌對頭孢曲松、慶大霉素、卡那霉素中介。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,肉牛屠宰過程中分離出沙門氏菌株對16種常見抗生素較敏感931%100%,沒有強(qiáng)耐藥菌株的出現(xiàn)。
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簡介:本文的主要研究工作如下對于實(shí)驗(yàn)室研制的緩釋肥料的生物學(xué)評價(jià)選用典型的不喜硝作物水稻來進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)室研制的緩釋肥料不僅提高了水稻的產(chǎn)量還提高了稻米的品質(zhì),且肥效優(yōu)于其它處理利用種植水稻和小青菜剩余土壤來進(jìn)行盆栽小青菜實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)室研制的緩釋肥處理的小青菜產(chǎn)量和品質(zhì)要顯著優(yōu)于其它處理利用UAN肥料盆栽小青菜,和之前的實(shí)驗(yàn)室緩釋肥盆栽小青菜對比,結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)室緩釋肥處理的小青菜產(chǎn)量和品質(zhì)都要顯著高于UAN處理。三個(gè)實(shí)驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)室研制的緩釋肥的生物學(xué)評價(jià)進(jìn)行進(jìn)一步的生物學(xué)評價(jià),更全面地表征了新研緩釋肥緩釋性能的優(yōu)越性。實(shí)驗(yàn)室研制的緩釋肥可以提高小青菜、水稻的產(chǎn)量和品質(zhì),提高肥料的養(yǎng)分利用率,減少浪費(fèi)和環(huán)境污染。PH對于實(shí)驗(yàn)室研制的新型緩釋肥氮養(yǎng)分溶出率的影響測定新型緩釋氮肥在PH為5、6、7、8、9的條件下的7天氮素累計(jì)溶出率,發(fā)現(xiàn)在不同PH條件下,緩釋肥中氮的溶出率都滿足緩釋要求,并且隨著PH的增加,溶出有逐漸變慢的趨勢。緩釋復(fù)合肥肥效的研制及緩釋效果評價(jià)在原有用乳化的方式制備緩釋氮肥的基礎(chǔ)上成功地加入磷、鉀肥以及微量元素鈣、鎂、鐵。制備了氮磷鉀復(fù)合肥,并且從緩釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,各個(gè)產(chǎn)品的初期溶出率均小于15%。通過本次實(shí)驗(yàn)確定了硝酸銨、尿素、氯化鉀的最佳質(zhì)量比為5∶4∶1。對于磷鹽的選擇,本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過一系列的溶解實(shí)驗(yàn),最終采用的是NH4H2PO4,其可以與尿素、硝酸銨和氯化鉀很好的共溶,最終氮磷比為25∶1。
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簡介:碩士學(xué)位論文克雷伯氏桿菌噬菌體的生物學(xué)特性及其抗性菌株的選育BIOLOGICALCHARACTERIZATIONOFABACTERIOPHAGEOFKLEBSIEUAPNEUMONIAANDSCREENINGOFRESISTANTSTRAINSTOTHEPHAGE學(xué)號21018023完成日期2Q墨生魚旦大連理工大學(xué)DALIANUNIVERSITYOFTECHNOLOGY大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要克雷伯氏桿菌是微生物法發(fā)酵生產(chǎn)L,3.丙二醇的重要生產(chǎn)菌種,生產(chǎn)過程中若發(fā)生噬菌體感染,將影響細(xì)胞生長和代謝,給生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前微生物發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中感染噬菌體的報(bào)道主要集中在乳制品工業(yè)以及少數(shù)的大宗化學(xué)品產(chǎn)業(yè),1,3.丙二醇發(fā)酵生產(chǎn)過程中噬茵體的信息比較有限,國內(nèi)尚處空白。鑒于上述情況,本論文分離出造成發(fā)酵異常的克雷伯氏桿菌的噬菌體,考察其生物學(xué)特性及其對發(fā)酵代謝的影響,對防治噬菌體污染進(jìn)行了初步的探索,并篩選了抗噬菌體的菌株。首先,對克雷伯氏桿菌的噬菌體進(jìn)行了鑒定、分離和分類。以絲裂霉素C誘導(dǎo)法鑒定產(chǎn)生異常發(fā)酵的生產(chǎn)菌株溶源性噬菌體,采用敏感指示菌法及ADAMS雙層平板法從引起發(fā)酵異常的克雷伯氏桿菌中分離純化出一株溶源性噬菌體。通過氯仿敏感性實(shí)驗(yàn)測定顯示,該噬菌體對氯仿不敏感,從而表明該噬菌體無包膜,其衣殼內(nèi)不含脂類物質(zhì)。用磷鎢酸負(fù)染法透射電鏡觀察,從形態(tài)學(xué)上進(jìn)行分類,屬于有尾噬菌體目,長尾噬菌體科。手工法提取噬菌體核酸,限制性內(nèi)切酶ECORI和覷刀DIII酶切后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析,表明該噬菌體的核酸為DSDNA。根據(jù)酶切圖譜估算的噬菌體基因組大小約為42KB。其次,測定了噬茵體的生物學(xué)特性,其最佳感染復(fù)數(shù)為1;一步生長曲線顯示,噬菌體的潛伏期與裂解期均為50MIN,裂解量為343個(gè)。還考察了溫度、PH、紫外線等理化因素對噬茵體活性的影響。該噬菌體對溫度比較敏感,其最適溫度為37℃,經(jīng)70℃處理30MIN即完全失活。其存活的PH范圍較寬,對酸堿均有一定的抗性,在PH7.8范圍內(nèi)效價(jià)最高,較耐堿性,在偏酸性條件下PH4效價(jià)降低速率較快。該噬菌體對紫外線照射非常敏感,照射3MIN活性即下降90%以上,照射時(shí)間達(dá)12MIN之后基本完全失活。再次,考察了噬菌體對克雷伯氏桿菌生長和發(fā)酵代謝的影響。結(jié)果顯示,與正??死撞蠗U菌相比,感染噬菌體的宿主細(xì)胞生長停滯期約8H,最高菌體濃度下降了33%。比較兩種情況下的主要代謝產(chǎn)物生成情況,其主產(chǎn)物1,3.丙二醇產(chǎn)量下降38%,代謝流偏向了乳酸等有機(jī)酸途徑。為探索針對噬菌體污染的防治措施,考察了CA2、三種不同濃度的表面活性劑以及不同濃度的氨芐青霉素對降低噬茵體影響菌體生長的作用,結(jié)果顯示所考察的三種方法條件對噬菌體均無有效的抑制作用。最后,篩選抗性菌株。通過高濃度噬菌體侵染條件下的自發(fā)突變經(jīng)初篩、復(fù)篩得到一株抗性菌株。發(fā)酵驗(yàn)證顯示,該菌株菌體生長未出現(xiàn)停滯現(xiàn)象,表現(xiàn)出了一定的抗性。但代謝流仍然偏向乳酸等有機(jī)酸途徑,導(dǎo)致1,3.丙二醇產(chǎn)量偏低。進(jìn)一步采用等離子體
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簡介:量子點(diǎn)屬于零維納米材料,具有納米材料的基本效應(yīng),在生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、醫(yī)學(xué)和材料學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。水相合成的量子點(diǎn)具有良好的生物相容性,可以直接應(yīng)用于生物體系。文中以巰基乙酸為穩(wěn)定劑,用水相法合成發(fā)光性能優(yōu)良的量子點(diǎn),并開展了相關(guān)生物學(xué)研究。論文主要研究內(nèi)容如下1、CDSE量子點(diǎn)與OVA的相互作用。在水相溶液中以巰基乙酸為穩(wěn)定劑合成了CDSE量子點(diǎn),采用紫外光譜和熒光光譜對其進(jìn)行表征。紫外光譜掃描發(fā)現(xiàn)CDSE量子點(diǎn)在460NM處有特征吸收峰熒光光譜表明CDSE量子點(diǎn)在650NM處有單一發(fā)射峰。本文利用紫外可見吸收光譜法、熒光光譜法研究了CDSE量子點(diǎn)與卵清白蛋白OVALBUMIN,OVA的相互作用。結(jié)果表明CDSE量子點(diǎn)會(huì)猝滅OVA的熒光,為了判斷猝滅機(jī)制的類型,測定25℃、30℃和37℃三個(gè)溫度下的熒光光譜,判斷出CDSE量子點(diǎn)對OVA的猝滅類型屬于靜態(tài)猝滅機(jī)制。同步熒光分析OVA分子中酪氨酸、色氨酸的特征發(fā)射峰,發(fā)現(xiàn)兩者峰型基本沒有變化,說明CDSE量子點(diǎn)的存在對OVA分子的微環(huán)境幾乎沒有影響。2、CDSE量子點(diǎn)對細(xì)胞的影響作用研究。本論文在體外研究了CDSE量子點(diǎn)對PC12細(xì)胞存活率的影響,以及對人外周血淋巴細(xì)胞微核率的影響。結(jié)果表明CDSE在低濃度條件下,對PC12細(xì)胞的存活率影響較小,而CDSE濃度較高時(shí),細(xì)胞的存活率呈下降趨勢。微核實(shí)驗(yàn)表明在研究的濃度范圍內(nèi),CDSE量子點(diǎn)的存在,對淋巴細(xì)胞的生長無明顯影響,但細(xì)胞微核率有所增加,未發(fā)現(xiàn)染色體畸變,說明CDSE量子點(diǎn)對人淋巴細(xì)胞分裂過程的影響較小。3、CDSE量子點(diǎn)的體內(nèi)生物學(xué)效應(yīng)研究。文中把一定量的CDSE量子點(diǎn)注射小鼠體內(nèi),觀察CDSE對小鼠生長的影響,結(jié)果表明CDSE處理組與對照組相比其肝、脾和腎腫大,鮮重增加,說明CDSE量子點(diǎn)對小鼠的肝、脾、腎有損傷,對小鼠產(chǎn)生毒害作用。除此之外,還通過ELISA實(shí)驗(yàn)探討了CDSE量子點(diǎn)的免疫學(xué)效應(yīng)。并采用電感耦合等離子體質(zhì)譜ICPMS測對照組與CDSE處理組血清中CD和SE的含量,結(jié)果表明試驗(yàn)組血清與對照組的血清相比,其中CD和SE的含量都有相應(yīng)的增加,表明其在小鼠體內(nèi)具有累積效應(yīng)。
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簡介:本論文通過3種蛋白酶酶解鱷魚肉的產(chǎn)物比較、成分分析和生理功能研究開發(fā)鱷魚多肽保健品。分別用菠蘿蛋白酶、胰蛋白酶以及中性蛋白酶對鱷魚肉進(jìn)行酶解處理以酶解產(chǎn)物中的游離氨基酸含量的多寡即降解度為標(biāo)準(zhǔn)探討了酶解的最佳條件包括水解時(shí)間、酶量、溫度等結(jié)果表明采用胰蛋白酶酶解較為理想酶解時(shí)間為4H酶量為04%較為合理。將酶解處理液通過離心去除不溶的雜質(zhì)取上清噴霧干燥得到的鱷魚活性多肽粉為白色粉末得率為105%100G鮮肉得到105G干粉顯著高于文蛤肉粉的得率65%。分析該保健品的主要成分、金屬元素、氨基酸組成和多肽分子量的范圍發(fā)現(xiàn)鱷魚多肽粉中氨基酸種類齊全含量豐富占干物質(zhì)的7704%其中8種人體必需氨基酸含量豐富占干物質(zhì)的2745%為所有氨基酸總量的3563%。尤其人體需要量最大的賴氨酸和亮氨酸含量顯著較多。支鏈氨基酸包括纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1199%芳香族氨基酸包括苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為542%。同時(shí)鱷魚多肽粉中對人體有益的金屬元素含量從高到低依次為K、NA、CA、MG、FE、ZN、CU其中鎂、鐵元素含量豐富分別可達(dá)到103353MGKG和25386MGKG。對人體有害的重金屬含量都大大低于國家食品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的安全劑量。通過MALDITOF質(zhì)譜分析得到鱷魚活性多肽主要由分子量主要集中在10001300DA的這個(gè)范圍之間。分子量在11876DA、12384DA的多肽含量較高。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示我們使用的酶解方法酶解效果較為理想、鱷魚肉得到較為徹底水解。研究本品對酪氨酸酶的抑制效果、抗氧化作用、對小鼠的抗疲勞作用、對昆明種小鼠的急性毒理作用和免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明鱷魚多肽對酶活力有較強(qiáng)的抑制作用且抑制率與其濃度成正相關(guān)。導(dǎo)致酶活力下降50%所需的鱷魚多肽的濃度IC50為660MGML對DPPH自由基和羥基自由基都具有很強(qiáng)的清除作用在較低的質(zhì)量濃度下即有較高的清除效果且隨其質(zhì)量濃度的增加而不斷增強(qiáng)其IC50分別為65和12MGML抗氧化作用明顯。根據(jù)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)國際GB151932003食品急性毒性試驗(yàn)中最大耐受劑量法對清潔級KM小鼠無毒害作用作用后小鼠均健康無異常反應(yīng)解剖無明顯病變其LD5015GKG鱷魚多肽粉鱷魚肉多肽粉有促進(jìn)小鼠胸腺和脾臟的生長發(fā)育提高機(jī)體免疫功能小鼠爬繩和力竭游泳實(shí)驗(yàn)顯示鱷魚多肽粉具有提高小鼠運(yùn)動(dòng)能力通過提高血液中SOD酶活力降低乳酸和BUN含量以及LDH酶活力達(dá)到緩解疲勞的目的。
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簡介:噬菌體污染對工業(yè)微生物轉(zhuǎn)化過程具有破壞性的影響。噬菌體污染可使發(fā)酵菌體裂解從而導(dǎo)致發(fā)酵系統(tǒng)的癱瘓對產(chǎn)品質(zhì)量也有不利的影響給生產(chǎn)企業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2酮基D葡萄糖酸2KETODGLUCONICACID2KGA是采用細(xì)菌發(fā)酵工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的有機(jī)酸之一其生產(chǎn)菌熒光假單胞菌也同樣遭受到噬菌體的污染帶來的影響是延緩葡萄糖消耗和降低2KGA產(chǎn)率嚴(yán)重時(shí)可以終止發(fā)酵。本研究在分離純化熒光假單胞菌噬菌體的基礎(chǔ)上對其生物學(xué)特性進(jìn)行研究提出有效的補(bǔ)救措施以降低發(fā)酵過程中噬菌體污染帶來的損失。研究結(jié)論主要如下1通過雙層平板法從熒光假單胞菌K1005的異常發(fā)酵液中分離出1株烈性噬菌體。電鏡觀察結(jié)果表明噬菌體形態(tài)為蝌蚪狀具有直徑約99NM的六角形頭部帶有非收縮性的長尾尾長約103NM粗徑約39NM。通過分析確定其為1株新發(fā)現(xiàn)的噬菌體將其命名為KSL1在噬菌體分類中屬長尾噬菌體科。限制性酶切分析顯示噬菌體KSL1基因組大小約為53KB。2從噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)、一步生長曲線、對酸堿和熱的耐受性等方面研究了噬菌體KSL1的生物學(xué)特性進(jìn)一步了解噬菌體KSL1與其宿主菌之間的基本關(guān)系。測得噬菌體KSL1感染其宿主菌熒光假單胞菌K1005的最佳感染復(fù)數(shù)為0001測定了噬菌體KSL1感染其宿主菌熒光假單胞菌K1005的一步生長曲線潛伏期約為90MIN裂解期約為75MIN裂解量為52在PH710條件下噬菌體KSL1較穩(wěn)定當(dāng)PH低于7或高于10時(shí)噬菌體KSL1的穩(wěn)定性受到顯著的影響噬菌體KSL1對溫度較敏感在80℃和90℃條件下可以分別于30MIN和15MIN內(nèi)完全滅活采用“終點(diǎn)滴定返濁法”測得熒光假單胞菌K1005耐噬菌體KSL1突變的頻率為16106。3相對定量地描述了不同發(fā)酵時(shí)期噬菌體的污染對2KGA生產(chǎn)所造成的危害。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明噬菌體污染時(shí)期愈早所造成的危害愈大。在噬菌體存在的條件下適當(dāng)添加新鮮菌液可以明顯改善2KGA的發(fā)酵生產(chǎn)能力提高了發(fā)酵轉(zhuǎn)化率和生產(chǎn)強(qiáng)度縮短了發(fā)酵周期降低了由于噬菌體污染所造成的經(jīng)濟(jì)損失即采取補(bǔ)種措施可以有效減輕噬菌體污染給2KGA發(fā)酵帶來的不利影響。
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簡介:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論生殖生物學(xué)相關(guān)的生物信息工具和數(shù)據(jù)庫的開發(fā)作者姓名學(xué)科專業(yè)導(dǎo)師姓名完成時(shí)間張遠(yuǎn)偉遺傳學(xué)史慶華教授二。一二年九月二十九日文中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。除己特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含任何他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名7氏舀車’簽字日期塵墜生壘中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)位論文授權(quán)使用聲明作為申請學(xué)位的條件之一,學(xué)位論文著作權(quán)擁有者授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán),即學(xué)校有權(quán)按有關(guān)規(guī)定向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱,可以將學(xué)位論文編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人提交的電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后也遵守此規(guī)定。導(dǎo)師簽簽字日期
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簡介:竹鹽和巖鹽都是原鹽經(jīng)特殊加工得到的食用保健鹽,以堿性著稱,具有抗炎、殺菌、治療胃腸道疾病、抗癌、抗腫瘤等功效。本文考察了竹鹽(九烤竹鹽)和巖鹽(喜馬拉雅巖鹽)的理化性質(zhì)及感官品質(zhì),探究了竹鹽和巖鹽在防治慢性代謝性酸中毒和其繼發(fā)慢性腎病方面的功效,以及對3種人體腫瘤細(xì)胞株(胃癌BGC823、SGC7901和腸癌CACO2)的體外增殖抑制功效。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下1通過測定竹鹽、巖鹽和原鹽(日曬海鹽)的氯化鈉含量、PH值、電導(dǎo)率和元素組成,并進(jìn)行感官評定得到三者的氯化鈉含量為原鹽>巖鹽>竹鹽三種食鹽溶液的PH值差異顯著,在高50%、中10%、低02%三個(gè)試樣濃度下,竹鹽和巖鹽水溶液均為堿性,且呈濃度依賴關(guān)系而原鹽水溶液在這些濃度下均呈弱酸性。在低濃度02%時(shí),竹鹽和巖鹽的電導(dǎo)率高于原鹽竹鹽和巖鹽中的鐵、鉀、鎂、鈣、鋅、銅等元素含量均高于原鹽竹鹽和巖鹽的感官品質(zhì)優(yōu)于原鹽。2將SD大鼠分為正常組N14和模型組N84,自由飲服028MOLLNH4CL溶液14D進(jìn)行血液酸化造模,后將模型大鼠分為正常對照組、空白對照組、持續(xù)模型組、陽性對照組、竹鹽組、巖鹽組和原鹽組N7,按1MLDAY1100G體重1灌胃14D(陽性對照為015%檸檬酸鈉溶液,試驗(yàn)樣品為150%的竹鹽、巖鹽和原鹽溶液),給鹽前后測定大鼠動(dòng)脈血和靜脈血血?dú)?、大鼠血清碳酸酐酶活性、大鼠腎臟指數(shù)、血清和尿液NA、CI、K、CA2、P水平、尿微量白蛋白及血清尿素氮、肌酐、白蛋白濃度HE和PAS染色后電鏡觀察試驗(yàn)大鼠的腎臟組織。結(jié)果表明1竹鹽和巖鹽均較陽性對照和原鹽能更有效抑制慢性代謝性酸中毒大鼠血液PH值的下降,提高全血堿剩余量和血漿碳酸氫根濃度,抑制血清碳酸酐酶活性的升高,竹鹽的抗血液酸化效果優(yōu)于巖鹽。2竹鹽和巖鹽能有效防止酸中毒大鼠的腎臟肥大P<001降低血清和尿液中CI水平P<001,促進(jìn)腎臟對CA2的重吸收P<005或P<001顯著降低尿蛋白和血清尿素氮的濃度P<001防止腎小管擴(kuò)張,上皮細(xì)胞腫脹壞死抑制腎小球增大和系膜細(xì)胞增生。原鹽則無此功效,而因不同指標(biāo)結(jié)果的不一致性,難以判斷竹鹽、巖鹽和陽性對照抗酸中毒引起的慢性腎病的功效差異。3MTT結(jié)果顯示竹鹽和巖鹽對正常細(xì)胞GES1無明顯影響,對SGC7901、BGC823和CACO2三種胃腸道癌細(xì)胞具有較好的體外增殖抑制效果,而原鹽對四種細(xì)胞的作用效果不一。竹鹽、巖鹽和原鹽均顯示出對胃癌SGC7901細(xì)胞的增殖抑制作用,并呈劑量時(shí)間依賴效應(yīng),其中竹鹽的作用效果最佳,竹鹽、巖鹽和原鹽作用于胃癌SGC7901細(xì)胞24H的IC50值為057~111%,作用48H的IC50值為029~043%,竹鹽效果最佳竹鹽和巖鹽對胃癌BGC823細(xì)胞和結(jié)腸癌CACO2細(xì)胞的抑制效果良好,但未呈現(xiàn)明顯的劑量時(shí)間依賴效應(yīng),竹鹽的作用效果仍為最佳,竹鹽作用于BGC823細(xì)胞24和48H的IC50值分別為029%和057%,作用于CACO2細(xì)胞的IC50值分別為011%和014%,而原鹽對BGC823細(xì)胞的生長影響無規(guī)律可言,甚至促進(jìn)其生長,其作用于CACO2細(xì)胞24和48H的IC50值分別為015%和021%。本研究結(jié)果對竹鹽和巖鹽在抗酸中毒、抗慢性腎病和體外抗腫瘤方面的深入研究提供了一定借鑒意義,并為兩者作為堿性保健鹽的開發(fā)應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。
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簡介:目的探討基于乙肝病毒核心蛋白HBC的改造位點(diǎn)及形式,使形成攜帶細(xì)胞穿膜肽或配體的核心顆粒,以作為HBV感染模型改造的基礎(chǔ)。方法1用不依賴酶切連接的分子克隆方法RLIC構(gòu)建HBC、HBV11C及各種HBC改造質(zhì)粒。2將各種HBC重組體與HBV11C共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,通過提取細(xì)胞內(nèi)核心顆粒DNA,SOUTHERNBLOT檢測DNA中間體,來判斷相應(yīng)基因工程改造HBC是否支持HBV復(fù)制,形成包裹核酸的核心顆粒。結(jié)果1成功構(gòu)建在HEK293細(xì)胞內(nèi)有效支持HBV復(fù)制的WTHBC與HBV11C反式互補(bǔ)系統(tǒng)2HBC釘突部位AA7980缺失或替換不支持HBV復(fù)制3HBCAA8693缺失或替換后功能缺陷4HBCN末端插入短肽后能以較低水平支持HBV復(fù)制5HBCN末端可作為普遍有效的融合位點(diǎn),用ABC接頭連接,可支持長片段EGFP238AARFP225AA、VSVG511AA融合。結(jié)論我們構(gòu)建了有效的HBC與HBV11C反式互補(bǔ)系統(tǒng),該系統(tǒng)可檢測各種改造的HBC是否具有包裹核酸形成核心顆粒類病毒VLPS的功能。利用該系統(tǒng),我們檢測到HBCAA7980及AA8693缺失或替換后均存在功能缺陷,這些序列可能與HBC的完整結(jié)構(gòu)及功能有關(guān)。N末端可作為有效的改造位點(diǎn),支持各種長度的外源蛋白融合,可長達(dá)511AA。
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簡介:目前,鱷主要用于皮具生產(chǎn),以及鱷肉的食用方面。鱷皮鱷肉生產(chǎn)利用后,鱷皮下脂肪一般被廢棄,造成資源浪費(fèi)與環(huán)境污染。本文通過提取鱷皮下腳料鱷皮下脂肪中的油脂,分析鱷油中的理化性質(zhì),脂肪酸成分,膽固醇含量等,并進(jìn)行生物學(xué)效應(yīng)研究。開發(fā)鱷油的在食用、化妝品中的潛在市場。利用乙醚法從鱷脂肪中提取鱷油,油得率較高,達(dá)53%。鱷油的相對密度為08983GCM3,水分含量009%,碘值99G100G,酸值02685MGG,皂化值191MGG,過氧化值3373MEQKG,粘度12MPAS,易溶于乙醚石油醚等有機(jī)溶劑。粗提鱷油精制工藝的最佳參數(shù)利用50%的磷酸脫膠,添加量為鱷油油量的1%用365%的氫氧化鈉脫酸,添加量為油量的15%用活性炭和活性白土脫色,用量比例為1∶20,添加量為油量的21%采用真空脫臭,真空度為0085KPA,時(shí)間為60MIN。利用氣相色譜分析鱷油的脂肪酸組成,結(jié)果顯示粗提鱷油中所含的主要脂肪酸為C16∶0、C18∶1和C18∶2。精制鱷油中的主要脂肪酸為C18。通過原子光譜吸收分析儀分析鱷油中金屬元素含量。發(fā)現(xiàn)對人體有益的金屬元素從高到底依次為CA、NA、K、FE、MG、ZN,對人體有害的重金屬含量都大大低于國家食品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的安全劑量。利用鐵硫磷試劑光度法測得粗提鱷油的膽固醇含量為113425±00670ΜG100G,精制鱷油的膽固醇含量為52227±06587ΜG100G。本研究中的粗提鱷油,具有一定抗氧化、清除自由基的,對DPPH的清除率與鱷油含量成正比,半清除濃度025MGML。研究溫度、光照時(shí)間對鱷油抗氧化穩(wěn)定性的影響。不同光照時(shí)間下測得的POV值之間的差異性較不顯著,而不同溫度時(shí)問的POV值則具有顯著性差異,溫度越高抗氧化的穩(wěn)定性就越差,提示了鱷油應(yīng)在20℃左右保存并適當(dāng)避光。通過干燥器控制濕度的方法對鱷油進(jìn)行吸濕和保濕性能測試,在相對濕度RH為81%的環(huán)境中,鱷油的吸濕效果不明顯,僅078%。在RH為43%的環(huán)境中,其保濕率達(dá)10321%。利用離體WISTAR鼠皮模擬人體皮膚,鱷油作為促滲透劑效果顯著,促滲透率隨時(shí)間的延長而增大,8H時(shí)鱷油的促滲透率高達(dá)90%。通過與五種食用油比較理化性質(zhì)、膽固醇含量和脂肪酸組成,得出精制鱷油是一種適合食用的動(dòng)物油脂。
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