簡介：分類號分類號R78密級密級公開公開研究生學位論文論文題目（中文）論文題目（中文）模擬微重力效應與XRAY輻射對人MEC1細胞生物學的影響論文題目（外文）論文題目（外文）THEBIOLOGICALEFFECTSOFHUMANMEC1CELLSSIMULATEDBYMICROGRAVITYXRAYRADIATION研究生姓名研究生姓名王衛(wèi)平學科、專業(yè)學科、專業(yè)口腔醫(yī)學口腔修復學研究方向研究方向口腔修復學學位級別學位級別碩士校內(nèi)校內(nèi)導師姓名導師姓名、職稱職稱何祥一教授校外導師姓名校外導師姓名、職稱職稱黨秉榮副研究員論文工作論文工作起止年月起止年月2015年10月至2016年12月論文提交日期論文提交日期2017年4月論文答辯日期論文答辯日期2017年5月學位授予日期學位授予日期2017年6月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市I模擬微重力效應與XRAY輻射對人MEC1細胞生物學的影響中文摘要中文摘要目的目的通過研究模擬微重力效應與XRAY輻射后黏液表皮樣癌MUCOEPIDERMOIDCARCINOMA，MEC細胞生物學的影響，探討模擬微重力效應應用于在臨床的可行性。方法方法按設定條件的不同進行分組，即空白對照組（C），XRAY輻射組（X），模擬微重力組（M），模擬微重力XRAY輻射組（XM）。輻照劑量為0，05，1，2，4GY。根據(jù)CCK8法來觀察XM組與X組中MEC1細胞相關檢測指標的差異來分析其增殖能力的變化；通過平板細胞克隆形成實驗計算XM組與X組細胞形成的克隆數(shù)，并統(tǒng)計出各自的克隆形成率以此反映MEC1細胞的生長活力的差異；利用TRANSWELL細胞侵襲實驗根據(jù)MEC1細胞數(shù)量的變化分析模擬微重力效應對其侵襲力的影響；采用流式細胞儀檢測并計算XM組與X組MEC1細胞各分期占整個細胞周期的比例并以此來探討其意義。結(jié)果結(jié)果1）XM組MEC1細胞在24H時平均OD值分別為0559，0489，0474，0357，0321均小于X組（P005）。2）XM組MEC1細胞的克隆形成率平均為383，30233，16667，8533，4134均小于X組（P005）。3）XM組MEC1細胞在24H時侵襲細胞數(shù)平均為10267，90，72，55，3933均少于X組（P005）。4）XM組MEC1細胞在24H時，G2M期所占的比例分別為258，3003，348，5096，5957與X組相比有明顯阻滯（P005）。結(jié)論結(jié)論模擬微重力效應與XRAY輻射對人MEC1細胞的增殖及侵襲能力均起到了抑制作用并可增強其放射敏感性，這為研究模擬微重力效應應用于臨床提供了一定的實驗依據(jù)。關鍵詞關鍵詞模擬微重力效應，XRAY射線，人MEC1細胞

簡介：光固化復合樹脂由于其易操作、美觀和具有優(yōu)異的機械性能，使得其在齒科修復中能得到廣泛應用。光固化復合樹脂是由基體樹脂、無機增強填料、光引發(fā)劑和其他助劑混合而成的糊劑。復合樹脂要進入臨床試驗，必須要通過國家食品藥品監(jiān)督管理局CFDA指定機構(gòu)的檢測。本課題組一直致力于齒科修復材料的基礎和產(chǎn)業(yè)化研究，光固化樹脂是其中重要的一類。固化動力學、耐磨耗性能、壓縮強度、撓曲強度、聚合體積收縮和生物學性能等，是復合樹脂實現(xiàn)理想修復的關鍵性能。本論文研究通過樹脂配方設計，重點考察引發(fā)劑、填料粒徑和配比對復合樹脂性能的影響，依據(jù)牙科學聚合物基修復材料國家標準YY10422011），結(jié)合新的檢測方法，對光固化復合樹脂理化與生物學性能評價體系進行了系統(tǒng)研究。主要工作如下（一）基于光固化復合樹脂最常用的樟腦醌CQ和N，N一二甲胺基甲基丙烯酸乙酯DMAEMA引發(fā)體系，通過研究不同引發(fā)劑含量下復合樹脂的固化動力學及其固化物的溶出行為，并與其細胞毒性相關聯(lián)。以雙酚A甲基丙烯酸縮水甘油酯BISGMA和雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯TEGDMA為樹脂基體，添加78WT％的鋇玻璃粉（04ΜM），加入05、1或3WT％的CQDMAEMA，通過實時紅外和差示掃描量熱法PHOTODSC研究樹脂混合物的固化動力學，通過力學測試和斷面形貌觀察，通過37℃在水或乙醇介質(zhì)中的溶出成分檢定，通過浸提液培養(yǎng)和細胞活死染色評價細胞毒性等多種手段，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著引發(fā)劑用量增加，①樹脂雙鍵轉(zhuǎn)化率和轉(zhuǎn)化速率都隨之提高②固化樹脂樣條的撓曲強度也相應上升③從樹脂固化物中溶出的未反應單體的量顯著下降④細胞毒性明顯降低。此外，將固化后的樹脂置于37℃水環(huán)境中，可檢測到后固化反應的發(fā)生，進一步減小可溶物的溶出。由此確定，引發(fā)劑在復合樹脂中的用量為13WT％，可使復合樹脂的固化性能、力學性能和生物相容性滿足應用要求。（二）基于上述復合樹脂體系，選用三種不同粒徑的鋇玻璃粉填料，通過改變它們在復合樹脂中的添加比例，研究填料粒徑組成對復合樹脂性能的影響。以BISGMATEGDMA為樹脂基體，添加3WT％的CQEMAEMA，鋇玻璃粉添加總量為78WT％，改變?nèi)N粒徑鋇玻璃粉的添加比例，評價了填料對樹脂固化動力學、力學性能、聚合收縮、耐磨耗性能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①在保持無機填料添加總量一致的情況下，所有樹脂的固化行為沒有表現(xiàn)出明顯差異②所有體系中，無機填料都在樹脂基體中分散良好，界面粘結(jié)良好，因此它們的力學性能也沒有表現(xiàn)出明顯差異③所有體系的聚合體積收縮在2528％，隨著小粒徑填料含量的增加，表現(xiàn)出上升的趨勢④隨著小粒徑填料含量的增加，復合樹脂的耐磨耗性得到明顯提高。由此確定，填料的粒徑分布，尤其是小粒徑填料的比例，對復合樹脂臨床長效修復的兩個關鍵性能（聚合收縮、耐磨耗性）有調(diào)控性能。本論文研究成果可為齒科修復用光固化復合樹脂的配方設計和產(chǎn)品質(zhì)量控制提供有益參考。

簡介：缺鐵性貧血是目前嚴重影響人類健康的疾病之一，它是由于體內(nèi)貯存鐵不能滿足正常紅細胞生成的需要而引發(fā)的貧血。據(jù)WHO報道，全世界已有超過20％的人群患有不同程度的貧血。傳統(tǒng)的補鐵劑有無機鐵鹽、有機鐵鹽、氨基酸螯合鐵等，雖然它們的鐵含量較高，但由于其對身體均存在不同程度的副作用，嚴重影響了鐵的生物利用率。為了得到安全高效的補鐵劑，本實驗以生物相容性良好的類人膠原蛋白HLC為原料，通過巰基化改性，以FESO4為配體，制備出一種新型的巰基化類人膠原蛋白鐵SHHLCFE復合物補鐵劑。本實驗對SHHLCFE的合成工藝進行了優(yōu)化，最終得出制備SHHLCFE的最佳條件為PH65，溫度25℃，物料比MSHHLCMFE24∶1，底物濃度CSHHLC4％。采用火焰原子吸收光譜法、紅外光譜法和熱重分析法分別對HLC、SHHLC和SHHLCFE復合物三者進行了比較。結(jié)果表明通過進一步的工藝優(yōu)化，SHHLC與鐵的結(jié)合能力有了顯著的提高，每摩爾SHHLC可以結(jié)合3534摩爾鐵離子。紅外光譜的數(shù)據(jù)表明SHHLC與鐵離子的結(jié)合位點主要集中在蛋白的NH基團上。熱力學分析證明了SHHLCFE具有良好的熱穩(wěn)定性。采用小鼠成纖維細胞L929以及MTT法對SHHLCFE的安全性進行了評估，初步證明了SHHLCFE復合物是安全無毒的，并且具有促進細胞生長的作用。進一步采用聚丙烯酰胺凝膠電泳及凝膠過濾色譜對模擬體外消化的樣品做了定量的分析。模擬體外消化聯(lián)合CACO2細胞吸收實驗表明，SHHLCFE相比于其它補鐵劑，鐵的生物利用率有了顯著的提高，同時發(fā)現(xiàn)維生素C在一定程度上能夠顯著提高鐵的生物利用度。最后，通過建立缺鐵性貧血模型小鼠，研究幾種補鐵劑的補鐵功效，結(jié)果顯示鐵的生物功效性的大小依次為SHHLCFE消化物＞SHHLCFE＞甘氨酸螯合鐵＞琥珀酸亞鐵＞硫酸亞鐵。表明SHHLCFE復合物作為一種新型補鐵劑，為將來進一步開發(fā)研究為口服補鐵劑有一定的潛力。

簡介：實驗目的產(chǎn)生毒副作用是腫瘤藥物治療失敗的關鍵性因素。基于腫瘤組織高表達LEGUMAIN和CD44透明質(zhì)酸受體的生物學特性，我們設計、制備了基于透明質(zhì)酸（HYALURONICACID，HA）的LEGUMAIN響應釋放阿霉素載體，使阿霉素（DOXUBICIN，DOX）在LEGUMAIN及CD44高表達的惡性腫瘤組織中聚集、釋放，提高藥物對腫瘤組織的靶向性，增加藥物的治療效果。藥物的靶向運輸和緩釋是增加藥物的治療效果和減少藥物的副作用的一項重要措施，本項目的實施對于探索腫瘤藥物靶向治療新方法具有重要的理論和實踐意義。實驗方法為了實現(xiàn)LEGUMAIN響應釋放的效果，首先將DOX與LEGUMAIN的底物多肽（PEP）化學鍵合，形成阿霉素多肽衍生物（DOXPEP）。用柱層析的方法分離純化，得到DOXPEP純品，并用ESIMS、NMR等對DOXPEP進行結(jié)構(gòu)解析。隨后將DOXPEP在EDCNHS催化下，嫁接到HA的羧基上，并用微乳化法在ADH作用下進一步交聯(lián)，形成多面體狀的HAPEPDOX載藥納米粒子。應用馬爾文粒度分析儀測定納米顆粒的粒徑、ZETA電位、多分散指數(shù)（PDI），并評價納米顆粒在酸性條件（PH50）和中性條件（PH70）下的穩(wěn)定性。使用掃描電子顯微鏡（SEM）和透射電子顯微鏡（TEM）觀察納米粒子的形貌特征。使用UPLCMSMS檢測LEGUMAIN敏感的納米藥物的體外釋放情況。使用雙掃描激光共聚焦顯微鏡觀察各細胞對藥物的攝取并用流式細胞術(shù)定量細胞對藥物的攝取。使用CCK8評價藥物的細胞毒性。構(gòu)建A549人肺癌異種移植瘤模型，將透明質(zhì)酸包載藥物及游離DOX通過尾靜脈注入動物體內(nèi)，定時取血，熒光法測定血清中阿霉素總量（包括釋放和未釋放），并用UPLCMSMS測定釋放的藥物濃度（DOXLEU）。以獲得該納米藥物在體內(nèi)的緩釋及LEGUMAIN響應性質(zhì)。提取正常組織和腫瘤組織的蛋白質(zhì)，使用BCA蛋白測定試劑盒對提取的粗蛋白進行LEGUMAIN酶活性評價。用CY55近紅外熒光探針標記HAPEPDOX納米藥物，并將其及游離CY55通過尾靜脈注入荷瘤小鼠體內(nèi)，使用小動物活體成像系統(tǒng)在不同時間點觀察近紅外熒光發(fā)射強度（激發(fā)光670NM，發(fā)射光710NM），觀察納米藥物的體內(nèi)分布及腫瘤靶向性。使用酶標儀測定實驗組的荷瘤小鼠各組織PBS提取液中DOX的熒光信號（激發(fā)光470NM，發(fā)射光590NM），以定量納米藥物及游離藥物的組織分布情況。為了研究納米藥物的體內(nèi)抗腫瘤功效，將游離DOX、納米藥物及PBS經(jīng)尾靜脈注入荷瘤小鼠體內(nèi)，首次給藥后40天內(nèi)觀察小鼠的腫瘤體積及存活率。將經(jīng)一段時間藥物治療的荷瘤小鼠的腫瘤組織及心、肝、脾、腎等正常組織取出制成石蠟切片，并對腫瘤組織的切片進行HE染色，TUNEL細胞凋亡實驗及KI67免疫組織化學染色，以評價腫瘤組織的組織學變化及細胞凋亡情況。對正常組織的石蠟切片進行HE染色，TUNEL細胞凋亡實驗以評價藥物的系統(tǒng)毒性。實驗結(jié)果核磁共振譜圖證明阿霉素及其多肽衍生物已成功合成并成功將其接到HA上。納米粒子粒徑約為400NM，PDI約為02。TEM及SEM結(jié)果表明，納米粒子粒徑約為300500NM，為多面體結(jié)構(gòu)。藥物穩(wěn)定性實驗表明，納米粒子在生理條件（PH70）下較穩(wěn)定，而在酸性條件（PH50）下穩(wěn)定性較差。體外釋放結(jié)果表明，藥物釋放受LEGUMAIN調(diào)控。細胞攝取實驗表明，癌細胞（A549，MCF7和MCF7ADR）及正常細胞（L929）對納米粒子的攝取量均高于對游離DOX的攝取量。并且，癌細胞對納米粒子的攝取比正常細胞更顯著。細胞毒性實驗表明，相同藥物濃度下，納米粒子對癌細胞的細胞毒性更顯著，對正常細胞的細胞毒性不明顯；而游離DOX對癌細胞的細胞毒性不明顯，當其作用于正常細胞（L929）時，一半以上的細胞活力被抑制。小鼠血藥濃度變化情況表明，載藥納米粒子具有很好的緩釋作用。提取的粗蛋白樣品的LEGUMAIN酶活性評價結(jié)果表明，腫瘤組織的LEGUMAIN活性顯著高于其它組織。用腫瘤組織提取的蛋白與透明質(zhì)酸包載的藥物共培養(yǎng)，結(jié)果顯示，藥物釋放顯著增加。小動物體內(nèi)成像結(jié)果顯示，納米藥物可在腫瘤組織中累積、釋放，具有良好的緩釋性和腫瘤靶向性。使用酶標儀測定實驗組的荷瘤小鼠各組織PBS提取液中DOX的熒光信號，結(jié)果表明注射納米藥物的荷瘤小鼠腫瘤組織中DOX的熒光值是游離DOX組的5倍，并且與游離DOX相比，HAPEPDOX納米藥物在心臟、肝臟和腎臟中分布很少。納米藥物體內(nèi)抗腫瘤特性研究結(jié)果顯示，對照組的腫瘤體積隨時間變化快速增加；游離DOX可以抑制腫瘤生長，但對小鼠具有全身毒性，這會影響小鼠的存活率；而我們制備的納米藥物可明顯抑制腫瘤生長且毒性較低，具有很高的治療功效。荷瘤小鼠的心、肝、脾、腎及腫瘤組織切片的HE染色，TUNEL細胞凋亡實驗和KI67免疫組織化學染色結(jié)果顯示，對照組的腫瘤組織生長旺盛；藥物治療組（游離DOX及納米藥物處理組）的腫瘤細胞發(fā)生凋亡，其中，HAPEPDOX納米藥物治療組的腫瘤組織尺寸減小，具有最高的細胞凋亡率和壞死率，并且對正常組織的毒性最小。實驗結(jié)論我們設計合成的納米藥物具有將抗腫瘤藥物DOX特異性遞送至腫瘤組織的能力，具有較高的抗癌活性及較低的系統(tǒng)毒性，為治療惡性腫瘤提供了新的可能，具有很大的治療潛力。

簡介：磷酸鈣作為骨組織的主要無機成分，能與活體組織形成化學性鍵合，具有優(yōu)良的骨傳導性和骨誘導性，是目前學術(shù)界公認的適用于臨床應用的生物活性陶瓷材料。生物材料植入體內(nèi)后其表面與生物環(huán)境直接接觸，因此材料表面與細胞的相互作用是生物材料成功應用的關鍵因素之一。越來越多的研究表明生物材料表面的微納結(jié)構(gòu)能夠有效調(diào)控細胞的粘附、伸展、增殖和分化。基于此，本研究旨在羥基磷灰石陶瓷表面制備不同的微納結(jié)構(gòu)，研究表面微納結(jié)構(gòu)化磷酸鈣陶瓷的骨誘導性及其成骨作用機制。本文首先利用RNASEQ技術(shù)系統(tǒng)研究鈣離子對于間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響及作用機制之后使用分子對接技術(shù)研究羥基磷灰石分子與細胞外基質(zhì)蛋白纖粘連蛋白FN的相互作用機制，對羥基磷灰石陶瓷生物相容性及成骨誘導特性機制進行探討在此基礎上，為提高羥基磷灰石支架的生物活性特別是成骨誘導能力，采用水熱合成和機械處理的方法制備了具有不同表面微納結(jié)構(gòu)的羥基磷灰石陶瓷，對其進行表征和生物學功能檢測，最后對其表面微納結(jié)構(gòu)作用機制進行分析推測。主要內(nèi)容及結(jié)果歸納如下將大鼠BMSC培養(yǎng)在10MM鈣離子DMEM培養(yǎng)基中，分別對1、4、7天后的細胞進行轉(zhuǎn)錄組測序（以正常培養(yǎng)基做對照）。利用TOPHAT軟件對測序結(jié)果進行基因組比對，CUFFLINKS軟件進行轉(zhuǎn)錄本組裝以及差異表達基因搜索，最后使用網(wǎng)絡分析工具DAVID進行差異表達基因的歸類、注釋及功能分析。結(jié)果表明，鈣離子促進了BMP2基因的表達，同時抑制了BMP通道阻抑蛋白BMPER的表達對于ERRR，WNT和TGFΒ等其它成骨誘導相關信號通道分析表明，信號通道激活蛋白表達減少而阻抑蛋白表達增多。其次，利用AUTODOCK軟件分析羥基磷灰石分子與FN部分片段FNⅢ710之間的相互作用。結(jié)果表明羥基磷灰石分子與FNⅢ710的結(jié)合位點主要位于RGD區(qū)域所在的片段，并且此片段對于相鄰片段與羥基磷灰石分子的結(jié)合有促進作用。羥基磷灰石分子與FNⅢ710的結(jié)合位點主要位于RGD肽段的一側(cè)，不會影響FNⅢ710與細胞表面受體的結(jié)合羥基磷灰石分子與FNⅢ710的結(jié)合位點處精氨酸出現(xiàn)的頻率高。這從理論上闡述了羥基磷灰石良好生物相容性的分子機制。接著，使用鈣磷鹽將羥基磷灰石陶瓷支架進行浸漬處理，增加表面鈣磷成核位點，加入肌醇六磷酸IP6，150℃反應3H制備不同微納結(jié)構(gòu)磷酸鈣涂層。結(jié)果表明IP6調(diào)控磷酸鈣在支架表面沉積，形成長橢球狀顆粒組成微納結(jié)構(gòu)如水熱反應中無IP6，則支架表面形成六棱柱狀微納結(jié)構(gòu)，涂層厚度小。鈣離子釋放實驗表明，橢球狀磷酸鈣涂層支架鈣離子釋放速度快，釋放量多體外實驗表明，不同表面微納結(jié)構(gòu)支架都具有良好的生物相容性，橢球狀磷酸鈣涂層更加有利于間充質(zhì)干細胞MSC的成骨分化，其中BMP2和YAPTAZ扮演著重要的角色。最后利用打磨拋光方法在三種不同工藝制備的羥基磷灰石陶瓷表面制備微孔結(jié)構(gòu)，通過掃描電子顯微鏡SEM，X射線衍射儀XRD，輪廓儀等對表面微孔進行表征。結(jié)果表明，經(jīng)機械研磨后，致密羥基磷灰石陶瓷表面形成大量微納米級凹孔，平均內(nèi)徑分別是08577ΜM和11406ΜM。FN蛋白吸附實驗表明羥基磷灰石陶瓷表面微孔結(jié)構(gòu)影響了蛋白吸附。此外，分別在細胞與分子水平上通過免疫熒光染色、堿性磷酸酶ALP活性檢測、以及成骨相關基因的RTPCR檢測表明，材料表面微孔結(jié)構(gòu)化羥基磷灰石陶瓷細胞粘附及增殖無顯著差異，細胞形貌具有明顯不同，ALP活性有少量的差別成骨分化相關基因的表達也有較小的差異。綜上所述，磷酸鈣陶瓷表面的微納結(jié)構(gòu)通過調(diào)控蛋白的吸附、鈣離子的釋放影響成骨相關細胞的粘附與成骨分化。本文獲得的進展將對生物材料微納結(jié)構(gòu)的研究提供重要參考，為生物材料特別是磷酸鈣陶瓷骨替換材料的研究提供新的思路。

簡介：研究生李文靜李文靜CIDATELIWENJING導師趙述淼趙述淼副教授副教授SUPERVISASSOCIATEPROFESSZHAOSHUMIAO學位類型學位類型工程碩士工程碩士DEGREETYPEMASTEROFENGINEERING領域FIELD生物工程生物工程BIOENGINEERINGHUAZHONGAGRICULTURALUNIVERSITY碩士學位論文碩士學位論文MASTER’SDEGREEDISSERTATION飼用羅伊氏乳桿菌生物學特性及發(fā)酵工藝的研究飼用羅伊氏乳桿菌生物學特性及發(fā)酵工藝的研究PROBIOTICSPERFMANCEPTIMIZATIONOFFERMENTATIONOFLACTOBACILLUSREUTERI中國中國武漢武漢WUHAN，CHINA二○一六年六月一六年六月JUNE，2016

簡介：中藥藥效物質(zhì)基礎研究是中藥作用機理探討、創(chuàng)新藥物研制和建立與藥效相關的中藥質(zhì)量控制標準的基礎，是中藥現(xiàn)代化研究中的重中之重。而中藥藥效物質(zhì)發(fā)現(xiàn)是中藥藥效物質(zhì)基礎研究的核心內(nèi)容，建立中藥藥效物質(zhì)的快速篩選方法對中藥現(xiàn)代化研究具有重要的推動作用。本文聚焦于中藥藥效物質(zhì)發(fā)現(xiàn)方法的技術(shù)性問題，著重研究基于化學生物學方法結(jié)合高分辨質(zhì)譜技術(shù)的中藥藥效物質(zhì)快速篩選新方法。本研究主要內(nèi)容包括⑴建立HPLCESIQTOFMSMS方法對養(yǎng)心氏片的化學成分進行了系統(tǒng)性分析，共鑒定了其中127個化合物，對其結(jié)構(gòu)進行了分類和質(zhì)譜裂解規(guī)律的解析。采用DPPHLCMS分析技術(shù)對養(yǎng)心氏片中的抗氧化物質(zhì)基礎作了進一步的研究，從中快速篩選到34個潛在的抗氧化成分。其中丹酚酸A和丹酚酸B為最強的抗氧化物質(zhì)，其DPPH自由基清除活性高于VC。通過對大鼠口服養(yǎng)心氏片的入血成分進行分析，發(fā)現(xiàn)丹酚酸A和丹酚酸B可以入血，可能是養(yǎng)心氏片發(fā)揮體內(nèi)抗氧化作用的重要藥效物質(zhì)。⑵創(chuàng)新性地提出了一種血腦屏障人造膜平行性透過試驗與DPPH探針識別相結(jié)合的PAMPABBBDPPH方法，并將其應用于中藥中可透過血腦屏障的抗氧化物質(zhì)篩選。發(fā)現(xiàn)知母乙酸乙酯提取物為活性中藥提取物。通過DPPHHPLC結(jié)合高分辨質(zhì)譜技術(shù)，鑒定出知母提取物中的可透過血腦屏障的抗氧化物質(zhì)為2，6，4TRIHYDROXY4METHOXYBENZOPHENONE。體外研究表明，該物質(zhì)具有中等強度的抗氧化活性，其DPPH自由基清除能力略弱于VC等抗氧化劑，但是其血腦屏障人造膜透過能力很強，具有深入開發(fā)為腦保護藥物的價值。⑶將親和超濾LCMS方法與分子對接技術(shù)相結(jié)合，首次應用于中藥注射劑與人血清白蛋白相互作用的研究。發(fā)現(xiàn)丹紅注射液中的丹酚酸類成分有很強的人血清白蛋白結(jié)合作用，且與聯(lián)用藥阿司匹林的主要代謝產(chǎn)物水楊酸存在競爭作用。通過競爭性結(jié)合試驗、分子對接、結(jié)合位點探針替代試驗等方法解釋了其競爭機制。研究內(nèi)容為丹紅注射液與人血清白蛋白的相互作用研究奠定了基礎，同時也為中藥注射劑與人血清白蛋白的相互作用研究提供了新的思路。⑷提出一種基于固定化融合靶點親和色譜的親和選擇方法，將其應用于PPARΓ配體的篩選。通過基因工程技術(shù)將靶點受體與親和標簽融合，可以實現(xiàn)靶點蛋白的快速制備、定向固定及純化，從而應用于天然產(chǎn)物中相應配體的篩選。相比于之前報道的親和選擇篩選方法，可低成本地獲得大量靶點蛋白，實現(xiàn)快速、定向的靶點固定，并能提高篩選通量。應用該方法發(fā)現(xiàn)野菊花中的異綠原酸A具有較強的PPARΓ結(jié)合能力。該研究為親和選擇方法的建立提供了參考。

簡介：食品添加劑是現(xiàn)代食品工業(yè)的靈魂。我國食品添加劑使用標準GB27602014批準使用的食品添加劑，在單一使用情況下的危害已經(jīng)降到了最低水平，不會影響到食品的安全性。但是，在多元混合物體系中，各組分會發(fā)生交互作用，產(chǎn)生協(xié)同或拮抗或加和的效應，導致毒性與單獨存在時不同，這就對傳統(tǒng)食品毒理學理論及食品添加劑的風險評價提出了新的挑戰(zhàn)。本文首先選取阿斯巴甜、苯甲酸鈉、檸檬黃、對羥基苯甲酸甲酯鈉和日落黃這5種分子結(jié)構(gòu)中含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的食品添加劑作為實驗對象，用MTT法測試它們單獨使用對大鼠肝臟BRL細胞的增殖抑制情況。之后，選取了增殖抑制毒性較大的阿斯巴甜、對羥基苯甲酸甲酯鈉和苯甲酸鈉做為聯(lián)合作用試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)阿斯巴甜和對羥基苯甲酸甲酯鈉的聯(lián)合作用類型為相加作用，阿斯巴甜和苯甲酸鈉的聯(lián)合作用類型為協(xié)同作用。接著，以阿斯巴甜和苯甲酸鈉這組聯(lián)合作用的添加劑為主要研究對象，通過測定它們單獨或聯(lián)合作用處理對BRL細胞的細胞數(shù)量、細胞周期、微核率、細胞壞死和凋亡率等影響，探討它們的作用機制并進一步認定兩者之間聯(lián)合作用的類型。然后，采用ILLUMINA高通量測序技術(shù)對阿斯巴甜和苯甲酸鈉單獨或聯(lián)合處理的BRL細胞進行轉(zhuǎn)錄組測序，篩選試驗組和對照組內(nèi)差異表達的基因、開展這些基因的GO富集分析和KEGGPATHWAY代謝通路分析。最后，通過自由飲水的方式，讓小鼠在3個月內(nèi)連續(xù)攝入單獨或聯(lián)合添加阿斯巴甜和苯甲酸鈉的飲用水，記錄小鼠的體重和生理體征變化，測定其血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽汁酸含量、丙二醛、超氧化物歧化酶、總抗氧化能力和谷胱甘肽過氧化物酶等生化指標的含量，對其心臟、肝臟和腎臟進行石蠟組織切片，觀察這些臟器的病理變化。主要結(jié)果和結(jié)論如下15種食品添加劑單獨作用對BRL細胞的增殖抑制均與時間和濃度呈現(xiàn)正相關，毒性大小排序為對羥基苯甲酸甲酯鈉＞苯甲酸鈉＞阿斯巴甜＞檸檬黃≈日落黃。2阿斯巴甜和苯甲酸鈉單獨和聯(lián)合使用均會抑制BRL的細胞增殖，并使細胞周期阻滯在S期或者G0G1期，增加細胞微核發(fā)生率、細胞壞死率和細胞凋亡率，且阿斯巴甜和苯甲酸鈉的聯(lián)合作用類型為協(xié)同作用。3轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表明，阿斯巴甜處理組、苯甲酸鈉處理組、以及兩者間聯(lián)合處理組，對BRL細胞脅迫24H后的差異表達（在2倍以上）的基因分別有306個、412個和532個。這些差異表達基因的GO富集和PATHWAY代謝通路富集，初步揭示了這三種不同的環(huán)境暴露條件下對BRL細胞的分子機制。4阿斯巴甜和苯甲酸鈉單獨或聯(lián)合使用均會降低小鼠的體重，這三者的影響程度排序為聯(lián)合作用＞苯甲酸鈉＞阿斯巴甜。小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和丙二醛的含量均有不同程度升高，總抗氧化能力降低，且聯(lián)合組的作用均大于單獨使用組，可推知阿斯巴甜和苯甲酸鈉的聯(lián)合作用類型為協(xié)同作用。綜上所述，阿斯巴甜和苯甲酸鈉作用于BRL細胞時為協(xié)同作用，對小鼠的生物學影響也表現(xiàn)為協(xié)同作用。

簡介：經(jīng)皮植入器械穿過皮膚固定于體內(nèi)并保持部分于皮膚創(chuàng)口或伸出皮膚外，由于部分暴露于體外，就要求植入體與周圍皮膚組織形成良好的生物密封以避免發(fā)生感染。鈦及鈦合金以其良好的力學性能和骨整合性能被廣泛用作經(jīng)皮器械，然而鈦是生物惰性材料，植入體內(nèi)后與軟組織整合能力差，同時鈦植入體本身也無抗菌性能。為了降低術(shù)后感染的發(fā)生率，實現(xiàn)良好的生物密封，我們對鈦植入體進行納米結(jié)構(gòu)化的表面改性，以期獲得既有抑菌性能又有利于皮膚組織細胞黏附生長的功能表面。大量的研究顯示鈦表面二氧化鈦納米管具有多孔形貌和納米級粗糙度，有利于細胞粘附，并且能促進細胞增殖分化，這都表明二氧化鈦納米管改性的鈦植入體在植入材料領域有著良好的應用前景。本研究通過體外蛋白質(zhì)、細菌、巨噬細胞、表皮角質(zhì)細胞，成纖維細胞實驗以及動物皮下體內(nèi)實驗，探究納米結(jié)構(gòu)改性后的鈦經(jīng)皮植入體是否能與周圍組織形成良好結(jié)合，及其與體內(nèi)相關組織的整合過程，為其應用提供理論與實驗基礎。此外，還采用鈦結(jié)合噬菌體對鈦植入體進行納米結(jié)構(gòu)化表面改性并對其表面理化性能及生物相容性進行初步評價。本論文的主要工作及結(jié)論如下采用陽極氧化技術(shù)在鈦植入體表面構(gòu)建的二氧化鈦納米管膜TNT具有優(yōu)良的潤濕性和較高的比表面積，表面吸附的蛋白質(zhì)使材料具有更強的生物活性，可以促進細胞在材料表面的粘附等行為。由于TNT的表面粗糙度屬于納米級，不利于細菌在其表面粘附。在紫外和日光條件下，TNT的光催化效應使其表現(xiàn)出較好的抑菌能力。TNT的抑菌性能有助于減少經(jīng)皮感染的發(fā)生。在TNT表面培養(yǎng)巨噬細胞發(fā)現(xiàn)納米結(jié)構(gòu)抑制了巨噬細胞的增殖遷移及炎性因子分泌。脂多糖（LIPOPOLYSACIDE，LPS）修飾的TNT表面能夠促進巨噬細胞的遷移并調(diào)控其功能轉(zhuǎn)化，在短時間內(nèi)大量表達促炎性因子及時清除周圍的細菌等病原體，并且在炎癥消退后誘導巨噬細胞向促進組織修復的方向轉(zhuǎn)化。這表明在植入體誘發(fā)的感染環(huán)境下TNT不僅具有良好的炎性調(diào)控功能，而且還能促進組織修復。在不同生理環(huán)境下，研究TNT與人表皮角質(zhì)細胞HUMANEPIDERMALKERATINOCYTE，HACAT和人真皮成纖維細胞（HUMANSKINFIBROBLAST，HSF）之間的作用機制。TNT能促進HSF細胞的增殖遷移及相關因子分泌，但抑制了HACAT細胞的增殖及相關蛋白的表達。將兩種細胞接觸共培養(yǎng)時，TNT通過促進成纖維細胞的增殖分化進而促進角質(zhì)細胞的成熟分化，有利于在植入體表面形成與其緊密結(jié)合且完整的表皮真皮及皮下組織結(jié)構(gòu)。動物皮下短期（4H到7D）植入時，感染部位的TNT能有效激活免疫細胞釋放炎性因子，在炎癥得到控制后調(diào)節(jié)炎性因子的快速消退，促進皮膚組織細胞粘附于植入體表面。這表明TNT抑制細菌的初始粘附，在短時間內(nèi)能清除術(shù)后感染，有利于隨后組織愈合并與材料緊密結(jié)合。長期植入2W到8W實驗時，感染部位的TNT能避免炎性因子大量持續(xù)釋放，促進皮膚組織與其緊密結(jié)合和血管生成。這表明TNT植入體與皮膚組織形成良好的生物密封，從而抵御外界細菌侵襲，降低經(jīng)皮植入體感染風險。此外，通過鈦結(jié)合噬菌體對鈦植入體改性，表明鈦結(jié)合噬菌體與鈦表面具有較強的親和力及穩(wěn)定的結(jié)合性能，改性后的表面具有多孔結(jié)構(gòu)且有良好的細胞相容性。綜合體內(nèi)外實驗，發(fā)現(xiàn)TNT改性的鈦植入體能夠降低感染的發(fā)生率，促進皮膚組織與其緊密結(jié)合。當TNT改性的鈦植入植入后，血液和組織液蛋白迅速吸附到植入體表面，利于組織細胞粘附，而不利于細菌粘附。同時，細菌的存在可以激活巨噬細胞遷移至植入部位參與炎癥反應。細菌清除后，炎癥減弱，TNT及時調(diào)控巨噬細胞極化參與組織修復。隨后，真皮成纖維細胞粘附于植入體表面開始增殖分化、沉積基質(zhì)，表皮細胞也沿著真皮層遷移、錨定于植入體表面開始增殖分化形成表皮組織。TNT促進早期炎癥反應的及時消退以及成纖維細胞和表皮角質(zhì)細胞的相互作用，最終在植入體表面形成完整生物密封。

簡介：O連接N乙酰葡萄糖胺（OLINKEDNACETYGLUCOSAMINE，OGLCNAC）糖基化是一種與磷酸化相似的、動態(tài)的、可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，由O連接N乙酰葡萄糖胺轉(zhuǎn)移酶（OGT）和O連接N乙酰葡萄糖胺水解酶（OGA）協(xié)同完成。OGT負責將GLCNAC基團添加到蛋白質(zhì)的絲氨酸和蘇氨酸殘基上，OGA則將GLCNAC從蛋白質(zhì)上移除。OGLCNAC修飾和傳統(tǒng)的糖基化不同，它主要發(fā)生在細胞核和細胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)上，其糖鏈結(jié)構(gòu)僅有一個氧糖苷鍵連接的N乙酰葡萄糖胺單糖。在細胞內(nèi)OGLCNAC修飾和磷酸化直接或間接地相互作用，參與細胞的蛋白酶解、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導、細胞周期調(diào)控等重要生命活動。近年來研究也表明，OGLCNAC糖基化的異常與腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病、糖尿病等多種疾病密切相關。研究OGLCNAC糖基化修飾在生命科學和生物醫(yī)學中都具有重要意義。針對目前OGLCNAC糖基化修飾研究中的不足和空白，本文開發(fā)了一種基于銅沉積信號放大的OGLCNAC糖基化高靈敏比色檢測分析技術(shù)，同時應用微陣列芯片技術(shù)研究了前列腺細胞中特定蛋白質(zhì)的OGLCNAC糖基化，并進一步探討了OGA抑制劑對前列腺細胞增殖、遷移的影響。本研究主要內(nèi)容包括⑴麥胚凝集素（WGA）用作OGLCNAC的特異識別分子，進而通過生物素鏈霉親和素系統(tǒng)將膠體金顆粒（AUNP）引入到傳感器的表面。在還原劑抗壞血酸和硫酸銅存在的條件下，膠體金顆粒催化銅離子還原為銅并沉積于其表面，沉積銅的量與分析物的濃度成比例。其中AUNP催化（代替昂貴而不穩(wěn)定的生物酶）的銅沉積能夠有效地放大檢測信號，形成超高的檢測靈敏度。在加入氯化鐵（FECL3）后，沉積的銅被三價鐵離子（FE3）氧化成CU2，同時FE3被還原成亞鐵離子（FE2）。隨后，通過FE2和紅菲繞啉之間的配位產(chǎn)生紅色絡合物，引起溶液顏色的變化。因此，蛋白質(zhì)OGLCNAC修飾的水平可以通過用肉眼直接進行定性評價，或通過測量紅色溶液的吸收值來定量檢測。⑵研究了前列腺癌細胞系（PC3）和正常前列腺細胞系（RWPE1）的細胞裂解液中的總OGLCNAC糖基化水平。結(jié)果表明與正常細胞系RWPE1相比，癌細胞系PC3的總OGLCNAC糖基化水平顯著升高，這與文獻報道的結(jié)果一致。⑶蛋白質(zhì)微陣列芯片的結(jié)果表明癌細胞系PC3中的OGLCNAC糖基化修飾水平顯著高于正常細胞系RWPE1中的水平，同時經(jīng)OGA抑制劑THIAMETG處理的PC3、RWPE1細胞的裂解液中OGLCNAC修飾水平均高于未處理細胞系，驗證了抑制OGA的活性能夠提高細胞內(nèi)總OGLCNAC修飾水平。此外，與正常前列腺細胞RWPE1相比，前列腺癌細胞PC3中OGT表達水平升高，OGA的表達水平降低。這些結(jié)果也表明，OGLCNAC或許是一個很好的腫瘤分子標志物，可能在前列腺癌的診斷和治療中起著重要作用。⑷研究了細胞裂解液中CMYC、NFΚB、P53三種蛋白的表達及其OGLCNAC修飾水平，其中涉及經(jīng)THIAMETG處理的PC3、RWPE1細胞和未經(jīng)THIAMETG處理的PC3、RWPE1細胞。結(jié)果表明與未經(jīng)處理的細胞相比，OGA抑制劑處理后的兩種細胞中的CMYC、NFΚB蛋白OGLCNAC糖基化修飾水平升高，而P53蛋白的OGLCNAC糖基化修飾水平卻降低，這說明OGA抑制劑促進了CMYC、NFΚB兩種蛋白的OGLCNAC糖基化，抑制了P53蛋白的OGLCNAC糖基化。并且與RWPE1細胞系相比，PC3細胞中CMYC和P53的OGLCNAC修飾水平降低，而NFΚB的OGLCNAC修飾水平升高。⑸通過細胞計數(shù)、MTT實驗、細胞劃痕實驗等對細胞的增殖和遷移進行了評價。結(jié)果展示，經(jīng)OGA抑制劑處理的細胞，其OGLCNAC糖基化總水平升高，同時細胞增殖能力增強，遷移情況卻沒有明顯改變。

簡介：釀酒酵母細胞膜中含有豐富的甾醇類活性物質(zhì)，是活性維生素D及激素類藥物的重要中間體。生物甾醇合成代謝中，甾醇C4位脫甲基反應過程復雜，是甾醇活化的關鍵步驟，涉及了三步連續(xù)的氧化還原反應，在ERG25基因表達的C4氧化酶SMO，ERG26基因表達的C3脫羧酶3ΒHSDD及ERG27基因表達的C3酮還原酶3SR的催化下，C4位的甲基被特異性的氧化，脫羧，鄰位的酮基還原為羥基后進行新一輪的脫甲基反應，最終實現(xiàn)C4位雙甲基的脫除。C4脫甲基酶復合體中，除了ERG25P、ERG26P和ERG27P以外，另有一個跨膜支架蛋白ERG28P，其在麥角甾醇合成代謝中的相關研究相對較少。本課題擬采用酵母真核表達系統(tǒng)，研究酵母麥角甾醇合成通路中支架蛋白ERG28P在協(xié)助甾醇C4脫甲基多酶體系中其他亞基的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜正確定位及催化界面的有效形成中的生物學功能及關鍵作用位點，具體研究內(nèi)容如下本論文的第一部分內(nèi)容通過LOXPMARKERLOXP序列組件及CRELOXP系統(tǒng)，建立ERG28基因敲除的釀酒酵母細胞模型（BY4741△ERG28），檢測了野生菌BY4741和敲除菌BY4741△ERG28的干重，結(jié)果顯示ERG28基因的敲除顯著抑制了釀酒酵母的生長。構(gòu)建了ERG28P蛋白表達載體PYES2ERG28，并在BY4741△ERG28菌株中轉(zhuǎn)染PYES2ERG28，建立回復表達ERG28基因的菌株BY4741△ERG28PYES2ERG28，為研究ERG28P蛋白在甾醇合成代謝中的生物學功能建立細胞模型基礎。本論文第二部分研究內(nèi)容分析了ERG28P蛋白的生物學功能。利用氣相質(zhì)譜聯(lián)用GCMS法分析了BY4741△ERG28菌株和野生菌株細胞膜上麥角甾醇代謝組分及含量的差異，發(fā)現(xiàn)敲除菌BY4741△ERG28中麥角甾醇的前體產(chǎn)生累積，終產(chǎn)物麥角甾醇含量顯著降低，證實麥角甾醇合成通路被阻斷在回復表達ERG28基因的菌株BY4741△ERG28PYES2ERG28中，麥角甾醇代謝通路的前體累積物質(zhì)被重新去除，終產(chǎn)物麥角甾醇得到累積，從正反兩個方向證實ERG28P蛋白參與釀酒酵母麥角甾醇合成代謝。此外，分別構(gòu)建了GFP與ERG25P，ERG26P，ERG27P及ERG28P的融合表達載體，考察了ERG28P蛋白在C4脫甲基多酶復合物中分子作用機制，證實ERG28P蛋白輔助C4脫甲基多酶體系中其他亞基的蛋白折疊及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的定位，從而影響C4甾醇脫甲基反應。本論文第三部分通過生物信息學方法分析并預測了ERG28P蛋白的關鍵作用位點，構(gòu)建了一組ERG28P蛋白的截短突變表達載體，分別檢測其麥角甾醇合成代謝途徑中的中間代謝物，實驗結(jié)果初步發(fā)現(xiàn)并證實ERG28P蛋白序列中6372位氨基酸是甾醇C4脫甲基酶體系中的關鍵作用殘基，對釀酒酵母甾醇合成代謝通路有顯著影響。

簡介：越橘（VACCINIUMVITISIDAEALINN），俗稱藍莓，為杜鵑花科ERICACEAE越橘屬（VACCINIUMLINN）灌木或小喬木。全世界越橘屬植物約有450個種，我國已知有91個種，28個變種，主要分布在我國東北和西南地區(qū)。北美地區(qū)既是越橘原產(chǎn)地也是主要產(chǎn)區(qū)。越橘果實為藍色小漿果，富含多種維生素、黃酮、花青素，具有顯著提高視力和抗癌保健功效，近年來世界各地需求量不斷增加。南高叢越橘品種V3及LEGACY引種西南地區(qū)多年，V3長勢旺盛，但果實很?。籐EGACY果實中等，長勢較為旺盛，但在重慶每年春夏梅雨季節(jié)，葉片易出現(xiàn)大量褐色病斑，抗病性較差。由于多倍體植株具有器官巨大性、抗性增強及營養(yǎng)成分增加等特點，本實驗室連續(xù)若干年采用秋水仙堿對北高叢、南高叢越橘不同品種進行加倍，陸續(xù)得到了不同表型的變異植株。在誘變初期雖已經(jīng)對變異株的形態(tài)學及細胞學進行了分析鑒定，但在田間栽培過程中，變異株還陸續(xù)有新的表型特征出現(xiàn)。加倍后的多倍體回復突變問題一直是研究中的空白領域，植株在回復突變中的生物學特性及分子水平的變化等指標的記錄是進行基礎研究的重要數(shù)據(jù)。因此，本研究運用ISSR分子標記技術(shù)在DNA水平對變異株進行分析，并結(jié)合形態(tài)學和細胞學檢測方法對變異植株與正常植株的解剖結(jié)構(gòu)、生理指標、染色體數(shù)目進行分析研究和差異顯著性比較，進一步確認變異株在回復突變過程中的各方面指標的變化，旨在為越橘的多倍體育種提供基礎研究數(shù)據(jù)。主要研究結(jié)果如下1V3變異株移栽田間生長三年后，形態(tài)學鑒定顯示平均高度為對照的110％，莖直徑為對照的132，葉長、葉寬為對照的144、137。與對照相比，變異株長勢更好但果實較小，三棵變異株之間無顯著差異。LEGACY經(jīng)秋水仙素誘變后，根據(jù)表型特征分為L1、L2兩種類型。L1變異株表現(xiàn)多倍體的特性，經(jīng)鑒定莖粗，葉長、葉寬與對照相比分別增加了40、56、52，為顯著差異；L2變異株為分枝量增大類型，移栽田間后株高相比對照下降325，分枝量增加1944，為極顯著差異，葉長寬分別增加34、38，與對照相比差異顯著。2經(jīng)葉表皮氣孔觀察，氣孔密度方面V3變異株下降205；L1變異株下降116，與對照相比差異顯著；保衛(wèi)細胞葉綠體數(shù)目V3變異株增加146，L1變異株增加356，L2變異株增加246，與對照相比均為顯著差異。氣孔保衛(wèi)細胞平均長度、寬度L1變異株分別增加167、184，與對照差異顯著；V3、L2與對照相比差異不顯著。兩個品種的變異株葉片橫切結(jié)構(gòu)顯示葉片主脈直徑、上表皮厚度、柵欄組織及海綿組織厚度均顯著增加，LEGACY變異株的葉片結(jié)構(gòu)緊密度（CTR）與對照在5水平上存在差異，柵海比明顯高于對照，表明LEGACY變異株抗旱能力較對照有增強。3去壁低滲火焰干燥法對變異株莖尖染色體鑒定結(jié)果表明越橘V3及L1變異株均為二倍體細胞和四倍體細胞共存的嵌合體，多倍體細胞比率分別為4552、3862，較其誘導初期鑒定結(jié)果（70、4906）相比呈下降趨勢，表明在越橘異倍型嵌合體中，二倍體細胞分裂增殖速度較四倍體細胞快，加倍后有回復突變傾向。4V3變異株的葉綠素含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量均較對照顯著增加，丙二醛含量顯著下降；LEGACY變異株的葉綠素含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量均較對照增加，丙二醛含量下降，呈極顯著差異。表明變異株具有生長優(yōu)勢，抗逆性更強。5采用改良CTAB法獲取高質(zhì)量越橘DNA。通過直觀分析和方差分析結(jié)合建立了越橘ISSRPCR（20ΜL）最佳反應體系，各組分的濃度為10BUFFER2ΜL；TAQ酶075U；MG21875MMOLL1；DNA80NG；DNTP01MMOLL1；引物02ΜMOLL1。在此基礎上探討了引物UBC835的最佳退火溫度、循環(huán)次數(shù)和延伸時間，結(jié)果分別為542℃、35次、60S。電泳結(jié)果顯示優(yōu)化體系穩(wěn)定性較高。6對V3、LEGACY變異株及在田間栽培中出現(xiàn)表型變異的南高叢品種南好變異株（B1、B2、B3）及10個由本實驗室長期栽培保存的北高叢和南高叢越橘品種共21個樣品進行ISSR多態(tài)性擴增。從70個ISSR引物中篩選出10個多態(tài)性高且較穩(wěn)定的引物，共擴增出95個位點，多態(tài)性位點90個，多態(tài)比率為9470。UPGMA聚類顯示21個樣品的遺傳距離介于057083，均值07，在系數(shù)057處材料被分為南北高叢兩大分支。3個品種的變異株均表現(xiàn)出很高的多態(tài)性。與對照株相比，變異株在ISSRPCR擴增中的條帶差異為缺失、新增、既缺失又新增三種類型。A1、A2、A3變異株與對照V3之間遺傳相似系數(shù)為0800、0711、0722；L1、L2變異株與對照LEGACY之間遺傳相似系數(shù)為0800、0767；B1、B2、B3與對照南好之間遺傳相似系數(shù)為0633、0589、0578。結(jié)合變異株生物學差異和ISSR多態(tài)性分析，表明V3、LEGACY及南好的變異植株在DNA分子水平上發(fā)生改變。

簡介：分類號?????一UDCL73‘8L8密級?????編號?????午南大學CENTRALSOUTHUNIVERSITY碩士學位論文論文題目????整全生抱釜視憊工鮑???????????組熟塞焦潼化扭制研究??????學科、專業(yè)????一篁堡猻堂量量程????????研究生姓名??????一高超???????????導師姓名及專業(yè)技術(shù)職務????一顏愛氐?～熬撬????????2009年11月原創(chuàng)性聲明M111111111111111111111Y1718445本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名莖絲一日期三￡年且月二駒學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權(quán)保留學位論文并根據(jù)國家或湖南省有關部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學校可以公布學位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權(quán)中國科學技術(shù)信息研究所將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。名一畢札恥日

簡介：舒適度在汽車駕駛中起著越來越重要的作用。不舒適的駕駛姿勢，不僅會帶來嚴重的身體病變，例如脊柱骨骼、消化和心血管系統(tǒng)疾病，尤其是腰痛，嚴重時還會引起交通事故。因為司機駕駛的時間較長，尤其是出租車司機，每天駕駛操作8小時以上。舒適的、設計好的汽車室內(nèi)能夠減少笨拙的姿勢以及職業(yè)病的生成，并能刺激最佳的操作效能。因此，許多國家都積極開展有關駕駛舒適度的研究工作，尤其在西方發(fā)達國家，此方面研究更為全面。舒適度是人的主觀感受，它由心理和生理兩方面的因素構(gòu)成。本文通過三個系列的實驗，基于人體主觀心理感受和客觀生物物理測量，在我國首次對出租車駕駛員駕駛舒適度問題進行了系統(tǒng)研究，為人－車系統(tǒng)中人性化設計提供理論依據(jù)。實驗一引入意象尺度、口語分析等主觀評價方法，通過一系列的調(diào)查對駕駛舒適度影響因子進行了研究，結(jié)果表明1影響駕駛舒適度的主觀因子包括睡眠、駕駛時間、心情、身體狀況和疲勞等，客觀因子包括座椅舒適度、座椅的可調(diào)節(jié)性、振動、噪音、機器外觀、駕駛室空間、氣候控制、可視域、儀表盤和顯示、控制器以及控制方式、疲勞等。2駕駛操作舒適度與舒適度客觀影響因子研究的結(jié)果基本吻合，即座椅舒適度、振動、控制器以及控制方式、噪音等仍然是影響駕駛舒適度的主要因素。從總體來看，用戶對所駕駛過的汽車舒適度總體感覺為“一般”，略偏差。3用戶對汽車座椅的舒適度總體感覺為“一般”，略偏差。影響座椅舒適度的因子主要包括靠背形狀、靠背下支撐點和靠背上支撐點，其中以靠背下支撐點最為嚴重。實驗二考察了人在靜態(tài)駕駛環(huán)境下的身體多個關節(jié)的舒適度角度。結(jié)果表明，在實際靜態(tài)駕駛環(huán)境中，人體各個關節(jié)的舒適度角度要小于實驗室所測得的角度。實驗三借助SEMG技術(shù)對出租車司機進行駕駛試驗，通過對頸伸肌、豎脊肌、多裂肌、股二頭肌的SEMG測量，對最大背伸肌力和耐力負荷進行了研究，考察了駕駛員在動態(tài)駕駛情況下的舒適度。結(jié)果表明1隨著駕駛時間的增加，被試的耐力負荷持續(xù)時間持續(xù)降低；同時，被試的背伸肌力也隨著減少。2從全程的AEMG和MPF來看，差異性不大，這一原因可能是試驗中受到被試主觀因素如毅力、耐力等的影響；通過對肌電信號以及數(shù)據(jù)的分析，我們發(fā)現(xiàn)，被試的前20秒的數(shù)據(jù)和肌電信號比較好，實驗結(jié)果比較理想。3通過對前20秒的AEMG、MPF的均數(shù)以及MPF的斜率進行單因素方差分析，左、右側(cè)多裂肌前20秒SEMG信號特征指標MPF的下降斜率受駕駛時間影響顯著，而其它肌肉的影響不明顯。試驗表明，多裂肌可能是引起駕駛員腰痛的主要原因。4人體主觀舒適度感受和客觀試驗數(shù)據(jù)分析之間有很大的一致性。5通過對主觀舒適度函數(shù)和客觀舒適度函數(shù)的整合分析，對腰部舒適度指數(shù)進行了定義和規(guī)定，得到了腰部舒適度指數(shù)函數(shù)，用以指導和評價實際駕駛時的舒適度。根據(jù)實驗結(jié)論，本文提出了人機工程評價系統(tǒng)框架，并分析了其中的關鍵技術(shù)。在CAXA基礎上構(gòu)建了基于舒適度的人機工程評價系統(tǒng)，將實驗數(shù)據(jù)運用到系統(tǒng)中，以支持虛擬設計與評價、產(chǎn)品創(chuàng)新以及工作空間的設計與評估。最后對全文進行了概括性總結(jié)，并指出了理論和應用上有待進一步研究的方向。

簡介：潛水器是大洋勘查與深海科學研究的重要裝備，而耐壓殼起著保障下潛過程中內(nèi)部設備正常工作和人員健康安全的作用，其重量占潛水器總重的1412?，F(xiàn)役深潛器耐壓殼多為球形結(jié)構(gòu)，其存在幾何缺陷敏感性高、水動力學特性差、殼內(nèi)空間利用率低等問題，故針對于此，本文提出一種新型結(jié)構(gòu)蛋形耐壓殼替代球形耐壓殼。蛋殼是一種滿足正高斯曲線的多焦點、回轉(zhuǎn)型薄壁結(jié)構(gòu)，具有良好的重量強度比、跨距厚度比、流線型、美學特性、合理的材料分布等優(yōu)點，是一種優(yōu)異的仿生原型，所以本文將通過理論、數(shù)值與試驗相結(jié)合的方式，開展基于蛋殼生物學特性的深海耐壓殼仿生研究。本文主要研究內(nèi)容和結(jié)論如下1通過試驗對蛋殼生物學特性進行研究。通過開展鵝蛋殼尺寸、形狀、厚度等幾何參數(shù)測試分析，對蛋殼幾何特性進行研究；通過開展材料力學參數(shù)測試及抗壓試驗，對蛋殼抗壓能力進行研究。結(jié)果表明蛋殼的長軸、短軸以及蛋形系數(shù)都滿足正態(tài)分布規(guī)律，且厚度分布呈現(xiàn)兩端小中間大的特點；在靜水壓力下蛋殼具有極強的抗壓能力，可以承受約2T重的外載，且其破壞區(qū)域主要在中部，與數(shù)值模擬結(jié)果一致。2基于薄殼理論對蛋形耐壓殼進行仿生設計。首先，根據(jù)一般薄殼理論對蛋形殼體的強度與線彈性屈曲進行推導；接著，根據(jù)NR方程對蛋形耐壓殼的形狀設計進行簡單闡述；最后，在蛋形殼體強度與屈曲理論的基礎上，并同時考慮塑性與脆性兩種材料，分別對蛋形耐壓殼采用等強度與等屈曲原則進行壁厚的等厚與變厚設計，得出蛋形耐壓殼壁厚理論設計公式，為蛋形耐壓殼在深海潛水器中的應用奠定理論基礎。3通過數(shù)值法對蛋形耐壓殼屈曲進行研究。首先，確定4KM水深下的蛋形耐壓殼等厚與變厚兩種設計方案，并對其進行線彈性與彈塑性屈曲分析；接著，將蛋形耐壓殼與等效球形耐壓殼進行對比分析；最后，研究壁厚與形狀對蛋形耐壓殼的屈曲影響規(guī)律。結(jié)果表明蛋形耐壓殼綜合性能優(yōu)于球形耐壓殼，當?shù)靶文蛪簹ば螤钰吔谇蛐文蛪簹r，其缺陷敏感度將增加，且同等壁厚下，蛋形耐壓殼的缺陷敏感度低于球形耐壓殼，更加適用于深海潛水器。4通過比例模型試驗驗證蛋形耐壓殼屈曲機理。分別基于快速成型與沖壓成型技術(shù)對蛋形耐壓殼進行比例模型制造，并對樹脂與金屬蛋形耐壓殼分別進行靜水壓力試驗，對其失穩(wěn)載荷與破壞形式進行研究。結(jié)果表明快速成型的樹脂蛋形耐壓殼比沖壓成型的金屬蛋形耐壓殼更加接近于理想模型，且試驗中的樹脂蛋形耐壓殼發(fā)生線彈性屈曲失穩(wěn)，金屬蛋形耐壓殼則發(fā)生彈塑性屈曲失穩(wěn)，結(jié)果與數(shù)值、理論分析一致。