簡介：擬錐齒鯊是熱帶大西洋金槍魚延繩釣漁業(yè)中較常見的兼捕物種。它處于海洋生態(tài)系統(tǒng)的頂端，對海洋生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定和多樣性起著非常重要的作用。但由于它商業(yè)價值低兼捕后常常被丟棄其生物學數(shù)據(jù)和研究相對缺乏。目前該物種受漁業(yè)活動影響巨大，其資源狀況令人擔憂。根據(jù)我國金槍魚漁業(yè)國家觀察員20092015年在熱帶大西洋海域638°S1517°N，4202°W1853°W調(diào)查時采集的1561尾擬錐齒鯊數(shù)據(jù)、114尾脊椎骨樣本和相關(guān)漁業(yè)信息，本論文對其研究內(nèi)容和主要結(jié)果如下一、熱帶大西洋擬錐齒鯊生物學特征研究根據(jù)樣本中的1426尾擬錐齒鯊數(shù)據(jù)，按不同性別對其生物學特征進行研究和比較。結(jié)果表明熱帶大西洋雄雌性擬錐齒鯊在平均叉長、優(yōu)勢叉長方面均存在顯著性差異，熱帶大西洋擬錐齒鯊雌性樣本平均叉長顯著大于雄性樣本平均叉長；雄性和雌性擬錐齒鯊叉長與全重關(guān)系也存在顯著性差異；擬錐齒鯊的雌雄性比分別為1171，經(jīng)卡方檢驗不符合11比例；擬錐齒鯊攝食等級主要以0級和Ⅰ級為主，雄雌擬錐齒鯊的攝食等級無顯著性差異；熱帶大西洋雄性肝重指數(shù)為7474263，平均值為2004±39；雌性個體的肝重指數(shù)范圍為7943636，平均值為1833±50。雌雄個體肝重指數(shù)呈顯著性差異，雌性明顯大于雄性。擬錐齒鯊的懷胎個數(shù)為16個（其中未發(fā)現(xiàn)懷5胎的母體）；懷4胎的比例為81％；母體叉長范圍7799CM；全重范圍分別為42KG80KG；在同一母體中幼鯊性別比為11的概率為50，懷仔數(shù)量平均為372個，平均懷仔數(shù)量符合1∶1比例。二、熱帶大西洋擬錐齒鯊年齡的鑒定和生長的研究利用中國金槍魚漁業(yè)科學觀察員2012年11月2016年1月在熱帶大西洋631°S1215°N，1832°W3647°W采集的114尾擬錐齒鯊脊椎骨樣本雄性54尾，雌性60尾和相關(guān)數(shù)據(jù)，通過茜素紅S染色法、硝酸鈷染色法、硝酸鈷硫化銨染色法、樹脂包埋打磨法和X光攝影法，五種軟骨魚類常用的年齡鑒定方法對擬錐齒鯊進行年齡鑒定，根據(jù)試驗結(jié)果選擇一種合適的年齡鑒定方法以鑒定出擬錐齒鯊的年齡，并對其年齡和生長的關(guān)系進行研究。結(jié)果表明在本研究中用001的茜素紅S溶液對其脊椎骨進行染色的方法效果最佳；通過脊椎骨輪環(huán)得到雄性的年齡范圍為211A，雌性為210A；平均百分比誤差指數(shù)為941，鑒定精確度較高。叉長（LF）與其脊椎骨半徑VR的關(guān)系為LF11107VR34537，R20567；選用VONBERTALANFFY生長方程估算擬錐齒鯊生長參數(shù)為T0182，K0252，LF∞10774CM，壽命T∞119A。雄雌擬錐齒鯊叉長（LF）與其脊椎骨半徑VR的關(guān)系和叉長與年齡的關(guān)系均沒有顯著性的差異。三、熱帶大西洋擬錐齒鯊資源動態(tài)和空間分布研究根據(jù)1561尾擬錐齒鯊數(shù)據(jù)，對其資源動態(tài)和空間分布進行了初步分析，結(jié)果表明在研究的海域內(nèi)633°S1743°N，1825°W4203°W，擬錐齒鯊CPUE高集中區(qū)域為5°N10°N，20W30W；20102015年CPUE呈現(xiàn)波動，整體有上升的趨勢，但不顯著；軟骨魚類占總漁獲物的比例整體呈下降趨勢；擬錐齒鯊兼捕數(shù)量占總漁獲的58，占兼捕的軟骨魚類225；擬錐齒鯊在12月至次年3月的平均CPUE較高。擬錐齒鯊最大叉長組（叉長范圍在8590CM）的個體多分布在5°N75°N，275W375W和5°N0°，25W30W這兩個區(qū)域。擬錐齒鯊理論鉤獲深度范圍為140313M，平均深度為221M。1、2、3鉤位（140212M）的上鉤頻率最大，占總上鉤率的5559；10月至次年4月不同月份擬錐齒鯊的鉤位分布沒有顯著性的差異；妊娠期擬錐齒鯊明顯分布于較淺的水層；不同鉤位擬錐齒鯊的攝食等級無顯著性差異。四、熱帶大西洋擬錐齒鯊CPUE與環(huán)境關(guān)系的研究根據(jù)樣本中的1085尾擬錐齒鯊數(shù)據(jù)及TWEEDIE類分布理論和特點，建立了GAMTWEEDIE模型，對其CPUECATCHPERUNITEFFT的時空效應和與環(huán)境因子的關(guān)系進行了初步分析，結(jié)果表明時空因子（年，月，經(jīng)度，緯度）和環(huán)境因子對擬錐齒鯊名義CPUE的總偏差解釋為402，其中時空因子對其的影響均為顯著性，環(huán)境因子海表面高度、葉綠素A濃度、作業(yè)時天氣、海表面鹽度、海表面氣壓對其呈顯著性影響，而海況、農(nóng)歷和海平面溫度對CPUE的影響不構(gòu)成顯著性。20092015年擬錐齒鯊標準化CPUE呈現(xiàn)波動，整體呈上升趨勢。

簡介：本文利用DNA折紙作為反應平臺，解決抗體在液相中界面吸附困難的問題，利用AFM高分辨的單分子檢測手段探究抗體IGG的結(jié)構(gòu)生物學。DNA折紙是由一條單鏈M13MP18VIRALDNA鏈為主鏈，200多條訂書釘‖鏈分別與其配對形成的DNA納米結(jié)構(gòu)。根據(jù)DNA序列及位置，我們可以進行納米搜索與定位，將地高辛修飾在選定訂書釘鏈的位置，通過抗原抗體特異性分子識別反應，獲得由DNA折紙和抗原抗體組成的一種“超級納米結(jié)構(gòu)”。在含有一定濃度的MG2緩沖液體系中，攜帶較多負電荷的DNA納米結(jié)構(gòu)，通過正負電荷的作用，與云母襯底表面產(chǎn)生較強的吸附效果。由于抗體與DNA折紙是連接在一起的，借助DNA折紙良好的的界面吸附能力，抗體也固定于云母表面，為獲取抗體的高分辨圖像和研究抗原抗體分子識別提供了可能。本文工作主要包含以下兩個方面1）為了研究近生理環(huán)境下抗體的精細結(jié)構(gòu)，克服了抗體構(gòu)象因界面吸附取向帶來的成像難題。利用DNA折紙精確的納米定位方法，將抗體IGG“捆綁”在DNA折紙上在折紙的邊緣設計位點并修飾多個地高辛分子，每兩個鄰近分子為一組，讓抗體與之充分反應。在室溫、液體環(huán)境下獲得具有典型Y形特征的單個抗體分子的高分辨圖像，并得到抗體亞分子結(jié)構(gòu)的高度，長度等信息。2）為了研究抗原抗體相互作用機理，抗體臂展與抗原排布之間的規(guī)律，在DNA折紙外緣設計位點修飾多個地高辛分子，相鄰兩個分子為一組，讓抗體與之充分反應，研究抗體分子單價結(jié)合和雙價結(jié)合時的形態(tài)表現(xiàn)和效率。與上個實驗不同的是，調(diào)控并改變相鄰抗原位點的間距，使抗體結(jié)合抗原后表現(xiàn)出抗體臂展的差異，主要表現(xiàn)在角度的不同，并做了初步統(tǒng)計。

簡介：山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文紫娟茶中花青素提取方法及花青素生物學作用的研究姓名王帥申請學位級別碩士專業(yè)分析化學指導教師王日為20110606紫娟茶中花青素提取方法及花青素生物學作用的研究2關(guān)鍵詞花青素；分離；人血清白蛋白；DNA；生物學作用

簡介：本研究成功建立了雞胚原始生殖細胞PRIMDIALGERMCELLS，PGCS的體外培養(yǎng)體系，并對其生物學特性進行鑒定。探討了雞胚PGCS減數(shù)分裂過程及精子發(fā)生相關(guān)基因表達量的變化。分離培養(yǎng)8W綿羊的羊水干細胞AMNIOTICFLUIDSTEMCELLS，AFSCS并鑒定其生物學特性，為AFSCS應用于組織工程學及細胞移植治療提供理論依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)1使用在孵化箱中孵化55D的雞胚進行PGCS的分離。在體視顯微鏡下小心剝離出雞胚兩側(cè)性腺，剪碎后使用0125％胰蛋白酶002％EDTA吹打消化，然后接種在培養(yǎng)皿中使用HDMEM培養(yǎng)，并添加10％胎牛血清FETALBOVINESERUM，F(xiàn)BS，1MM丙酮酸鈉，1％GLUTAMAX，5NGMLSCF，5NGMLLIF，10NGMLBFGF，10NGMLIGF等因子促進PGCS的增殖及抑制分化。培養(yǎng)24H后，可在顯微鏡下觀察到PGCS克隆團的出現(xiàn)，此時的飼養(yǎng)層為雞胚性腺基質(zhì)細胞。48H后顯微鏡下觀察到PGCS克隆團數(shù)量增多，體積變大，呈典型的鋪路石樣。繼代培養(yǎng)時使用雞胚成纖維細胞CHICKENEMBRYOFIBROBLAST，CEF飼養(yǎng)層。無論是CEF飼養(yǎng)層還是雞胚性腺基質(zhì)細胞都能夠PGCS保持穩(wěn)定的未分化狀態(tài)。在本研究中PGCS可在體外連續(xù)培養(yǎng)2個月，經(jīng)AKP和PAS染色鑒定為陽性形態(tài)上PGCS較一般細胞大，折光性強RTPCR、免疫細胞化學鑒定IMMUNOCYTOCHEMISTRY和流式細胞分析FLOWCYTOMETRYFCM結(jié)果顯示，PGCS對生殖細胞及胚胎干細胞EMBRYONICSTEMCELL，ESCS的特異性標志物呈現(xiàn)陽性反應。2雞胚PGCS在骨形態(tài)發(fā)生蛋白BONEMPHOGEICPROTEINS，BMPS、激活素AACTIVINA和維甲酸RETINOICACID，RA的作用下可啟動減數(shù)分裂過程，進而在BOVINEPITUITARYEXTRACT，BPE、FOLLICLESTIMULATINGHMONE，F(xiàn)SH和睪酮TESTOSTERONE，T的促進下誘導生成精子。從QPCR結(jié)果可證明這些激素促進了PGCS向精子的分化。3在無菌狀態(tài)下使用注射器抽取8W綿羊胚胎羊水10ML，并以1500RPM的速度離心15MIN使細胞富集于離心管底部，最終將細胞接種至12孔板中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基選擇DMEMF12添加10NGMLBFGF。羊水中含有多種細胞類型，不同類型的細胞形態(tài)也不盡相同。傳代時選擇長梭形細胞占多數(shù)的那一孔進行傳代操作。消化條件為025％胰蛋白酶002％EDTA于375℃培養(yǎng)箱中消化1MIN。在經(jīng)過數(shù)次傳代細胞純度較高時，對AFSCS的生物學特性進行鑒定。RTPCR及免疫細胞化學檢測結(jié)果顯示AFSCS既表達間充質(zhì)干細胞表面標記物又表達胚胎干細胞特異性標志物。生長曲線實驗結(jié)果顯示AFSCS的增長呈現(xiàn)典型的S型。核型分析結(jié)果顯示綿羊AFSCS染色體數(shù)目為2N54，形態(tài)正常未發(fā)生變異。將AFSCS向成脂、成骨、成軟骨三個方向進行誘導，特異性染色結(jié)果及RTPCR檢測都說明成功誘導生成了脂肪細胞、成骨細胞和成軟骨細胞。表明AFSCS擁有向三個胚層分化的潛能。

簡介：天然高分子憑借其生物相容性好、可降解、易修飾等多種性質(zhì)，已成為制備納米材料的主要基材。通過自組裝制備的天然高分子納米載體更是由于其安全無毒、制備簡單、表面易修飾、載藥量高、控釋性能好等優(yōu)勢，在藥物及營養(yǎng)素遞送方面受到越來越多的關(guān)注。目前，提高納米粒子的穩(wěn)定性和功能性，并實現(xiàn)高效靶向遞送，已成為遞送領(lǐng)域研究的研究熱點。本文以玉米醇溶蛋白ZEIN為主要基材，通過自組裝的方式與兩種不同形式的多糖（陰離子多糖羧甲基纖維素鈉和陽離子多糖季銨鹽殼聚糖）自組裝形成納米粒子。以疏水性藥物紫杉醇PTX和疏水性營養(yǎng)素姜黃素CUR為模型負載物，研究納米運載體系對疏水性物質(zhì)的包封、保護以及體外緩釋的性質(zhì)，通過細胞實驗驗證載藥納米粒子的生物學特性。為進一步提高抗癌藥物的療效、降低毒副性，賦予運載體系定向性釋放的性質(zhì)，在已制備的納米粒子表面形成一層單寧酸金屬離子包被膜，通過膜的PH響應性崩解，賦予納米粒子PH響應性釋藥的性質(zhì)。本文主要研究結(jié)果如下1選擇PTX作為疏水模型藥物，通過自組裝方法制備負載PTX的玉米醇溶蛋白羧甲基纖維素鈉納米粒子PTXZEINCMC納米粒子。結(jié)果顯示當?shù)鞍踪|(zhì)與多糖質(zhì)量比為1∶3，投藥量為80ΜGML時，所得納米粒子粒徑為1594NM，載藥率高達935％。在此條件下可得到分散均勻的球形納米粒子，且其具有良好的PH穩(wěn)定性和儲藏穩(wěn)定性。體外緩釋實驗表明，相比于游離藥物的快速釋放，載藥納米粒子呈現(xiàn)明顯的緩釋特性。細胞吞噬實驗表明，藥物敏感的HEPG2細胞和藥物抗性的MCF7細胞對香豆素6標記的納米粒子的細胞吞噬均呈時間依賴性。同時，對于藥物抗性的MCF7細胞，在高給藥濃度下，載藥納米粒子比游離藥物顯示更強的細胞毒性。細胞凋亡實驗顯示，對于抗性細胞，載藥納米粒子組引起的細胞凋亡比例大于游離藥物的。免疫熒光實驗表明載藥納米粒子和游離的PTX均是通過促進微管的增生導致細胞凋亡。2研究陽離子多糖（季銨鹽殼聚糖，HTCC）與ZEIN的組裝行為，利用自組裝制備納米粒子，用于疏水性營養(yǎng)素CUR的負載。通過對殼聚糖季銨化改性，大大提高了殼聚糖在中性條件以及堿性條件下的溶解性。改變蛋白質(zhì)多糖質(zhì)量比可以得到不同粒徑、不同多分散系數(shù)PDI、不同負載率的納米粒子。當固定多糖為HTCC1MW8708103，蛋白質(zhì)多糖質(zhì)量比為1∶1時，所得納米粒子的負載率最高。與單純的ZEIN納米粒子相比，形成的ZEINHTCC納米粒子分布更加均勻，形狀更加規(guī)整。將CUR負載于納米粒子可顯著提高其光、熱穩(wěn)定性，且在相同的處理條件下相比于游離CUR具有更強的抗氧化活性。3為了進一步提高構(gòu)建的遞送體系的高效性，在之前的研究基礎上，引入了具有PH響應性的響應因子?；趩螌幩酺A分子與蛋白質(zhì)之間具有較強相互作用的鄰苯三酚結(jié)構(gòu)及其優(yōu)異的金屬螯合能力，以金屬離子為交聯(lián)劑在ZEIN納米粒子表面形成一層金屬有機涂層，成功構(gòu)建了一種新型的具有PH響應性的納米載體（ZEINTAMETAL納米粒子）。通過透射電子顯微鏡TEM對其微觀形貌進行觀察，發(fā)現(xiàn)這種雜化納米粒子具有更佳的分散性且粒徑更加均一，克服了大部分納米粒子在培養(yǎng)基中不穩(wěn)定的問題。傅里葉紅外光譜FTIR分析表明，TA與金屬離子之間存在較強的配位作用，同時TA與蛋白質(zhì)之間也存在著氫鍵相互作用與靜電相互作用。使用X射線光電子能譜XPS對納米粒子表面元素進行分析，金屬離子特征峰的出現(xiàn)以及CO比值的顯著變化均有效證明TA與金屬離子的引入。隨后以阿霉素DOX為模型藥物，對其包封率、緩釋性能進行研究。結(jié)果顯示，相比于ZEIN納米粒子，包被納米粒子對藥物的包封率顯著提高且在中性條件下PH74具有良好的緩釋性能，阻止了突釋現(xiàn)象的發(fā)生。同時，由于TACUⅡ復合膜具有PH響應性，賦予包被納米粒子良好的PH響應性釋藥的性質(zhì)。細胞吞噬實驗表明，與游離的DOX相比，通過內(nèi)吞作用進入細胞的納米粒子速度較緩慢對于包被的納米粒子，由于對藥物的PH響應性釋放，孵育較長時間才能觀察到細胞內(nèi)DOX的紅色熒光。位于包被納米粒子表面的TA可以原位還原金納米粒子，該體系為癌癥的光熱療法提供了新思路。4為了能更加精細的調(diào)控納米載體的PH響應性，利用TA對基體的粘附性以及金屬螯合能力、氨基與金屬之間的配位作用，在ZEIN納米粒子中引入含有氨基的HTCC，在制備的ZEINHTCC納米粒子表面包被一層金屬有機涂層。同時利用TA金屬離子以及氨基金屬離子之間配位鍵的PH響應性，賦予納米粒子PH響應釋藥的特性。與ZEINHTCC納米粒子相比，形成的包被納米粒子（ZEINHTCCTAMETAL納米粒子）分散性更好，粒徑分布更加均勻，形狀更加規(guī)整。FTIR研究表明，TA與金屬離子之間存在較強的配位作用同時TA，HTCC與蛋白質(zhì)之間也存在著靜電相互作用。XPS研究進一步驗證了包被納米粒子表面金屬離子和TA的存在。以DOX為藥物模型研究發(fā)現(xiàn)，包被的納米粒子對藥物的包封率相比于ZEINHTCC納米粒子也有顯著的提高。體外緩釋實驗表明以不同金屬離子作為交聯(lián)中心及金屬離子添加量的變化均會導致載藥納米粒子釋放行為的變化。與ZEINTAMETAL納米粒子相比，ZEINHTCCTAMETAL納米粒子呈現(xiàn)出更優(yōu)異的刺激響應性。細胞吞噬實驗顯示未經(jīng)包被的納米粒子存在明顯的突釋現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中即可快速釋放DOX。對于包被納米粒子，由于對藥物的PH響應性釋放，孵育較長時間才能觀察到較強的熒光。同時引入稀土元素，使其同時具有PH響應性和生物成像的功能。5考察金屬離子種類及化學計量比對TA金屬離子包被納米粒子（ZEINTAMETA）性質(zhì)的影響。金屬離子種類可顯著影響殼層厚度致使納米粒子的粒徑不同金屬離子濃度的增加會引起包被納米粒子粒徑的增加。在較低金屬離子濃度下，包被的納米粒子在培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性大大提到。但是對于TACUⅡ包被的納米粒子，隨著金屬離子濃度的增大，形成的納米粒子在培養(yǎng)基中穩(wěn)定性減小。隨后的FTIR分析得出金屬離子的含量顯著影響TA與金屬離子的配位作用，從而影響包被納米粒子吸收峰的移動XPS進一步驗證包被納米粒子中金屬離子以及TA的存在，且金屬離子的濃度影響包被納米粒子表面元素含量。細胞吞噬實驗表明細胞對ZEIN納米粒子和ZEINTAMETAL納米粒子的吞噬均呈現(xiàn)時間及濃度依賴性。細胞對包被納米粒子表現(xiàn)出更快的吞噬速率以及更高的吞噬量。金屬離子種類以及添加量影響細胞對納米粒子的吞噬效率。通過激光共聚焦顯微鏡CLSM觀察短時間細胞吞噬，細胞對包被納米粒子粘附性更強，納米粒子進入細胞速率更快。網(wǎng)格蛋白介導的吞噬作用是包被納米粒子進入細胞的主要途徑。同時包被納米粒子進入細胞，細胞膜穴樣凹陷介導的吞噬作用也可能起到一定作用。對于ZEIN納米粒子，胞飲作用對于納米粒子進入細胞至關(guān)重要。進入到細胞內(nèi)的納米粒子可以和細胞質(zhì)內(nèi)溶酶體共定位，觀察發(fā)現(xiàn)納米粒子沒有進入核區(qū)。

簡介：目的肺炎克雷伯菌是引起臨床感染的重要病原菌之一，常引起肺炎、尿路感染、血流感染等。1986年，臺灣首次報道了一種由肺炎克雷伯菌導致的患者多部位膿腫，并將其定義為高毒力肺炎克雷伯菌HVKP。此后，由HVKP導致的獲得性侵襲性感染，特別是化膿性肝膿腫PLA，使患者的健康遭到嚴重的威脅，特別是在亞裔人群中具有較高的感染率，須引起足夠重視。與經(jīng)典的肺炎克雷伯菌CKP相比，HVKP具有高黏液型菌落、獨特的莢膜血清型、攜帶毒力相關(guān)基因等特征。因此，本研究對本院HVKP的血清型分布及流行趨勢進行相關(guān)的調(diào)查研究，有利于分析其耐藥性、毒力相關(guān)基因及其分子流行病學特點。方法收集分離于溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院各種侵襲性感染患者的肺炎克雷伯菌臨床分離株共369株。應用VITEK全自動微生物分析儀對所有分離的肺炎克雷伯菌進行鑒定和藥敏試驗。收集感染患者的臨床病例資料。采用拉絲試驗檢測菌株高黏液表型。采用PCR法檢測肺炎克雷伯菌的莢膜血清型（K1、K2、K5、K20、K54和K57）和17種毒力相關(guān)基因（YBTA、UREA、UGE、WABG、YCFM、ENTB、IUTA、VATD、MAGA、FIMH、MRKD、AEROBACTIN、IRON、KFUB、RMPA、WCAG和ALLS）；應用多位點基因序列分型MLST技術(shù)對肺炎克雷伯菌進行序列分型；應用脈沖場凝膠電泳PFGE對其進行同源性分析。采用SPSS190統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。結(jié)果369株肺炎克雷伯菌中，84株為拉絲試驗陽性，判斷為HVKP，檢出率為228％，其中452％與PLA相關(guān)。多變量回歸分析顯示，4150歲的男性患者、PLA、糖尿病和高血壓是HVKP感染的獨立危險因素。其中K2型菌株檢出36株（429％，3684），是最常見的莢膜血清型；其次是K1型菌株（238％，2084）。750％的K1型菌株與PLA相關(guān)，而K2型菌株與多種類型的侵襲性感染相關(guān)。在HVKP菌株中IUTA、MRKD、AEROBACTIN、IRON和RMPA的陽性率顯著高于經(jīng)典肺炎克雷伯菌（P＜005）。MAGA、YBTA、ALLS和WCAG與K1型菌株有顯著相關(guān)性；而MRKD與K2型菌株顯著相關(guān)。MRKD僅在HVKP菌株（321％，2784）和K2型菌株（659％，2741）中檢測到。所有K1K2型菌株和CKP菌株均為RMPA陽性。950％的K1型菌株和975％K2型菌株中檢測到氣桿菌素AEROBACTIN。在69株K1、K2、K5、K20和K57型菌株中共檢測到21種ST型，其中ST23是最常見的類型（275％，1969），并且均為K1莢膜血清型。其次是ST65（261％，1869），均為K2型。ST23K1型菌株（842％，1619）與PLA密切相關(guān)，而ST65K2型菌株與多種類型的感染相關(guān)。PFGE結(jié)果顯示84株HVKP菌株的同源性分析是多樣化的。只有5個克隆群具有超過70的相似性，且含有3株以上菌。這5個克隆群一共只含有35株菌（417％，3584）。結(jié)論發(fā)現(xiàn)高血壓和4150歲的男性患者是HVKP引起侵襲性感染的危險因素。K2型菌株中ST型的組成比K1型菌株更多樣化。K1K2型菌株具有毒力相關(guān)基因的特定基因譜。

簡介：目的1針對銅綠假單胞菌LAS群體感應系統(tǒng)的LASR和LASI基因，設計和篩選出與其MRNA緊密結(jié)合的反義寡核苷核酸序列，以此為基礎設計合成反義肽核酸。2評估反義肽核酸對銅綠假單胞菌PAO1的生長、LASR和LASI基因表達、生物被膜形成及毒力因子表達的影響。方法一、銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因反義肽核酸的設計與篩選1銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因反義寡核苷酸的設計與篩選11目的基因的擴增根據(jù)GENEBANK數(shù)據(jù)庫提供的銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI全長基因序列，用軟件PRIMERPRIMER60設計擴增引物，進行LASR和LASI基因的PCR擴增。12構(gòu)建LASR和LASI基因MRNA表達質(zhì)?；厥詹⒓兓疞ASR和LASI基因擴增產(chǎn)物，與質(zhì)粒載體PGEMTEASYVECT進行連接重組。13重組質(zhì)粒PGEMTEASYVECTLASRLASI的驗證重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細菌DH5Α，利用藍白斑實驗篩選出陽性克隆。擴增后提取PGEMTEASYVECTLASRLASI質(zhì)粒并進行PGEMTEASYVECTLASRLASINOTI酶切鑒定和測序鑒定。14利用軟件RNASTRUCTURE52設計LASR和LASI基因MRNA反義寡核苷酸序列。15反義寡核苷酸的篩選進行LASRLASIMRNA體外轉(zhuǎn)錄，利用斑點雜交實驗篩選出反義寡核苷酸序列。2銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因反義肽核酸的設計與合成依據(jù)篩選出的反義寡核苷酸序列，按照肽核酸設計原則設計合成銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因反義肽核酸，并將其與穿膜肽KFF3K連接。二、銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因反義肽核酸生物學作用研究1反義肽核酸對銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因表達的影響利用QPCR方法檢測LASR和LASI基因MRNA相對表達量。2反義肽核酸對銅綠假單胞菌PAO1生長的影響酶標儀測定LB液體培養(yǎng)基中銅綠假單胞菌PAO1OD600和LB固體培養(yǎng)基計數(shù)菌落。3反義肽核酸對銅綠假單胞菌PAO1生物被膜形成的影響光學顯微鏡、掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜內(nèi)細菌含量。4反義肽核酸對銅綠假單胞菌PAO1毒力因子表達的影響采用ELISA技術(shù)檢測銅綠假單胞菌PAO1外毒素A、綠膿菌素含量的變化，QPCR方法檢測彈力蛋白酶LASB基因MRNA相對表達量。結(jié)果一、銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因反義肽核酸的設計與篩選1成功構(gòu)建LASR和LASI基因MRNA表達重組質(zhì)粒PGEMTEASYVECTLASRLASI，篩選出與銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因MRNA緊密結(jié)合的反義寡核苷酸序列。2以篩選出的反義寡核苷酸序列為基礎合成反義肽核酸，并將其與穿膜肽結(jié)合構(gòu)建了穿膜肽肽核酸。二、銅綠假單胞菌PAO1LASR和LASI基因反義肽核酸生物學作用研究1LASRLASI穿膜肽肽核酸抑制LASRLASIMRNA的表達，與對照組相比，其表達量有顯著差異，并且隨著穿膜肽肽核酸濃度增加，對LASRLASIMRNA的表達抑制作用增強。2LASRLASI穿膜肽反義肽核酸濃度≧40ΜM時，對銅綠假單胞菌PAO1的生長有明顯抑制作用，濃度越高，對生長的抑制作用越明顯。而穿膜肽和反義肽核酸本身對細菌的生長無明顯抑制作用。3光學顯微鏡、掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示，LASRLASI穿膜肽肽核酸轉(zhuǎn)染的銅綠假單胞菌PAO1，其生物被膜的形成明顯抑制。4LASRLASI調(diào)控的毒力因子彈性蛋白酶LASB、綠膿菌素和外毒素A等在穿膜肽肽核酸的作用下表達量均下降，與陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論1通過體外表達和斑點雜交實驗，成功效篩選出與目的基因LASRLASIMRNA緊密結(jié)合的反義寡核苷酸序列，并在此基礎上成功設計合成反義肽核酸并構(gòu)建了穿膜肽連接的穿膜肽肽核酸。2穿膜肽肽核酸明顯抑制LASRLASIMRNA的表達，實現(xiàn)對銅綠假單胞菌LAS群體感應系統(tǒng)的淬滅。3LASRLASIMRNA穿膜肽肽核酸能夠顯著抑制銅綠假單胞菌PAO1生物被膜的形成。4穿膜肽肽核酸成功抑制銅綠假單胞菌PAO1的生長，并明顯下調(diào)毒力因子彈性蛋白酶B基因及綠膿菌素和外毒素A的表達。5本研究設計的穿膜肽肽核酸可通過對銅綠假單胞菌LAS群體感應系統(tǒng)的淬滅，顯著抑制銅綠假單胞菌PAO1的生長及毒力相關(guān)因子的表達，為銅綠假單胞菌感染的治療提供新的思路。

簡介：點擊查看更多不同溶劑對殼聚糖穩(wěn)定性及生物學性能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：電子科技大學UNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINA博士學位論文DOCTORALDISSERTATION（電子科技大學圖標）論文題目符號計算及其在計算生物學中的應用學科專業(yè)計算機軟件與理論學號200810601005作者姓名賀錦敖指導教師符紅光教授SYMBOLICCOMPUTATIONANDITSAPPLICATIONSINCOMPUTATIONALBIOLOGYADOCTORALDISSERTATIONSUBMITTEDTOUNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINAMAJORCOMPUTERSOFTWAREANDTHEORYAUTHORHEJINAOADVISORPROFESSORFUHONGGUANGSCHOOLSCHOOLOFCOMPUTERSCIENCEENGINEERING

簡介：碩解放軍醫(yī)學院解放軍總醫(yī)院吒知位暈解放軍醫(yī)學院研究生學位論文原創(chuàng)性聲明秉承我院“忠誠、敬業(yè)、和諧、創(chuàng)新”的學風，本人聲明所呈交的論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機構(gòu)的學位及證書而使用過的材料，對本文的研究作出貢獻的個人或集體，均己在文中做了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關(guān)責任。論文儲虢羈訊期川7TF移指黝師徽孩耀醐◇∥卜D享解放軍醫(yī)學院研究生學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人保證畢業(yè)離院后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為解放軍醫(yī)學院或解放軍總醫(yī)院。學院有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文原件、復印件和電子版本，可以采用影印、縮印、掃描或其它手段保存論文以供被查閱和借閱。學院可以公布學位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外。論文作者簽名指導教師簽名日期加／7廠、夠日期仍7J。弓

簡介：由于木質(zhì)素的普遍存在，在工業(yè)生產(chǎn)尤其生物能源的產(chǎn)出中，植物很難被分解并加以利用。為更好地利用植物，降低工業(yè)生產(chǎn)的能量消耗，改造木質(zhì)素使其更容易被化學解聚成為熱門的研究方向。最新的研究發(fā)現(xiàn)，木質(zhì)素單體阿魏酸鹽轉(zhuǎn)移酶FMT可以在楊樹的木質(zhì)素多聚物中引入酯鍵，從而使木質(zhì)素更容易被分解利用，減少能耗，具有良好的應用前景。實驗證明，從當歸中提取DNA，克隆得到ASFMT相關(guān)基因，并把該基因轉(zhuǎn)到植物的基因組中，最終合成的木質(zhì)素中含有阿魏酸。本論文成功構(gòu)建了關(guān)于ASFMT1441AA的克隆，通過將蛋白連接GST標簽，成功使其在大腸桿菌內(nèi)進行表達。通過對表達的蛋白的純化，獲得了ASFMT的蛋白。通過結(jié)晶實驗，我們最終獲得八個可供晶體生長的池液條件，經(jīng)過一系列的晶體優(yōu)化，獲得了較高質(zhì)量的蛋白晶體。本論文的另一部分是關(guān)于擬南芥NSP1蛋白的結(jié)構(gòu)生物學研究，十字花科植物中有一種重要的次生代謝產(chǎn)物硫苷，黑芥子酶水解硫苷，硫苷水解過程與一些指示蛋白相關(guān)，不同指示蛋白存在時其代謝產(chǎn)物不同，到目前為止，已鑒定的指示蛋白包括表面活化蛋白ESPS，硫氰酸鹽形成蛋白TFPS和腈標記蛋白NSPS，只有NSP的結(jié)構(gòu)和催化機理尚未解決。本文對ATNSP1蛋白的結(jié)構(gòu)和功能進行研究，構(gòu)建了PET22B為載的重組質(zhì)粒，利用原核生物大腸桿菌表達系統(tǒng)表達出目的蛋白后進行晶體篩選，得到高質(zhì)量晶體后通過X射線衍射數(shù)據(jù)結(jié)合分子置換進行分析，目前已得到分辨率為302A的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)，分子對接揭示了ATNSP1中R157的不同構(gòu)象，本研究提出了不同指示蛋白的產(chǎn)物機制。

簡介：溫度敏感型水凝膠藥物輸送系統(tǒng)的構(gòu)建與生物學評價重慶大學碩士學位論文（學術(shù)學位）學生姓名孔非指導教師潘君研究員專業(yè)藥學學科門類理學重慶大學生物工程學院二O一七年四月重慶大學碩士學位論文中文摘要I摘要攻克癌癥的研究刻不容緩近年來，隨著納米技術(shù)的不斷進步，納米藥物輸送系統(tǒng)已成為開發(fā)新型制劑的焦點和熱點。納米藥物輸送系統(tǒng)不僅可以提高藥物的溶解度，改善藥物的動力學性質(zhì)，改變藥物的傳輸方式和途徑，還可以延長藥物的作用時間，實現(xiàn)局部定點治療和靶向治療，提高藥物療效，減少毒副作用。但是目前應用的抗癌納米藥物輸送系統(tǒng)治療實體腫瘤的療效仍不理想，藥物的生物利用度和治療效果仍有待提高。因此，提高藥物生物利用度，增強治療效果是納米藥物輸送系統(tǒng)需要解決的關(guān)鍵問題。在納米給藥系統(tǒng)的研究開發(fā)中，水凝膠常被廣泛應用于藥物的遞送和控制釋放。由于其具有良好的生物相容性和親水性，納米水凝膠是目前研究最深入的藥物載體之一。其中溫敏性水凝膠是目前人們研究和開發(fā)最多的智能水凝膠，并且已經(jīng)被廣泛應用于納米給藥系統(tǒng)。溫敏性水凝膠是一類對溫度產(chǎn)生響應的高分子聚合物，由于其相變溫度（LCST）可以與人體體溫相接近，也可以根據(jù)應用需求被調(diào)節(jié)，許多藥劑學者將其作為藥物載體。本論文構(gòu)建了一種新型水凝膠納米藥物輸送系統(tǒng)，用于化療藥物的輸送和控制釋放，同時，我們在藥物輸送系統(tǒng)中考慮了助劑的應用，期望通過助劑，提高藥物的生物利用度。論文的主要研究內(nèi)容有采用聚合反應，以N異丙基丙烯酰胺（NIPAM）和丙烯酸（AA）單體為主要原料，以N，N亞甲基雙丙烯酰胺（BIS）為交聯(lián)劑，以過硫酸銨（APS）為引發(fā)劑，得到一種生物相容性好、可注射的水凝膠藥物載體，這種載體能同時包載并輸送抗癌藥物和助劑。考察了不同單體比例水凝膠共聚物的溫度敏感型；采用傅立葉紅外光譜儀（FTIR）表征其結(jié)構(gòu)和組成；利用掃描電鏡（SEM）和動態(tài)光散射儀（DLS）表征其外貌和粒徑大小；考察了藥物的裝載和體外藥物釋放；在細胞水平上研究了它的細胞毒性和初步藥效；建立動物腫瘤模型，做體內(nèi)藥效評價實驗，研究納米藥物載體的抗腫瘤活性及在組織內(nèi)的分布。研究結(jié)果顯示合成的水凝膠顆粒大小均一、粘度低；藥物釋放速度快；隨著丙烯酸（AA）比例的增多，水凝膠的相變溫度（LCST）也隨之升高；體外細胞水平實驗顯示聯(lián)合使用助劑和化療藥物能有效提高抗腫瘤療效，降低耐藥性；體內(nèi)水平實驗證明了同時載送兩種藥物的納米藥物輸送系統(tǒng)明顯抑制了裸鼠的腫瘤生長，在提高藥物的生物利用度上存在明顯優(yōu)勢，實現(xiàn)了兩種藥物的協(xié)同増效作用，最終提高了腫瘤的治療效果。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞水凝膠，聚合反應，抗癌藥物，助劑

簡介：純鈦及鈦合金因具有良好的機械力學性能及生物相容性，已廣泛應用于矯形外科及口腔臨床。然而種植體相關(guān)感染仍是一個非常棘手且不易解決的術(shù)后并發(fā)癥之一，再者純鈦本身不能誘導骨沉積，因此，最新研究熱點主要是在如何提高種植體表面處理從而達到促進早期骨結(jié)合的同時，降低種植體周圍感染的發(fā)生，能夠縮短整體治療時間，修復因炎癥、外傷等造成的骨缺損。本課題組前期構(gòu)建的包載RHBMP2，SDF1和OPG的雙層納米微球具有符合臨床要求的釋藥特性，可以有效抑制破骨細胞活性，誘導骨髓間充質(zhì)干細胞募集遷移并向成骨向分化成熟，誘導鈣鹽沉積，形成骨組織。本課題以該雙層納米微球為基礎，采用振蕩滲涂交聯(lián)法在微弧氧化純鈦表面構(gòu)建新型功能性涂層，對涂層的釋藥特性進行了初步研究，并且對該涂層的體外生物學性能進行了初步評估，以期能夠為種植體早期愈合及骨缺損修復治療提供一條新思路。研究方法1以包載RHBMP2，SDF1和OPG的雙層納米微球為基礎，采用振蕩滲涂交聯(lián)法在微弧氧化純鈦表面構(gòu)建新型功能性涂層，掃描電鏡觀察新型涂層的表面形貌。2初步研究新型功能性涂層體外釋藥特性。3通過細胞毒性試驗（CCK8法），口腔黏膜刺激試驗以及溶血試驗對涂層體外生物安全性進行初步研究。4分別采用破骨前體細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞與涂層材料共培養(yǎng)的方法，對新型功能性涂層抑制破骨功能的特性以及對骨髓間充質(zhì)干細胞成骨效應的影響進行體外研究。通過細胞募集實驗對新型功能性涂層對干細胞遷移募集的影響進行研究。研究結(jié)果1通過振蕩滲涂交聯(lián)法在微弧氧化純鈦表面成功制備出新型功能性涂層，掃描電鏡下觀察該涂層具有良好的表面形貌，低倍鏡下可見雙層微球幾乎占據(jù)所有的微孔中，孔隙覆蓋率極高，高倍鏡下可見微球良好的分布于各微孔中，微球與微球之間，微球與微孔之間均通過明膠緊密交聯(lián)。2新型功能涂層的體外釋藥特性表現(xiàn)為一定的初期突釋和后期持久釋放；前24小時三種因子各自有約15％20從新型功能性涂層中釋放，后期緩慢釋放可達30天以上。釋藥特性同雙層載藥納米微球相似，且隨著PH值的下降，各因子的快速釋放效應更明顯。3細胞毒性試驗表明新型功能性涂層基本無細胞毒性，口腔黏膜刺激實驗表明新型功能性涂層無黏膜刺激性，溶血試驗表明新型功能性涂層無溶血性，因此，可初步認為該涂層材料具有良好的體外生物安全性。4通過破骨前體細胞與涂層材料共培養(yǎng)可以得出該涂層具有一定的抑制破骨細胞成熟分化的作用；通過骨髓間充質(zhì)干細胞遷移實驗可以得出該涂層具有一定的促進干細胞募集遷移的作用；通過骨髓間充質(zhì)干細胞分化及成骨誘導實驗可以得出該涂層一定程度上促進干細胞成骨向分化，并促進鈣鹽沉積形成骨組織。結(jié)論本課題構(gòu)建出來的鈦種植體表面新型功能性涂層具有良好的表面形貌，體外釋藥基本符合臨床要求，具有良好的體外生物安全性，一定的抑制破骨分化及促進骨髓間充質(zhì)干細胞遷移募集以及促進成骨向分化成熟的作用。因此，本課題構(gòu)建的新型鈦種植體涂層是一種潛在的能夠促進植體早期愈合及促進骨缺損修復的有效方法。

簡介：申請工學博士學位論文同倫分析方法在非線性力學和數(shù)學生物學中的應用作者指導教師院系專業(yè)KHANHINA廖世俊FC刪P戶7。弓‘／船舶海洋與建筑工程學院船舶與海洋結(jié)構(gòu)物設計制造上海交通大學二零零八年十二月上海交通大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名盧∥舭∥∥九既日期形年L礦月如ET

簡介：生物學作為一門揭示生命現(xiàn)象以及生命規(guī)律的自然科學，與我們?nèi)祟惾粘Ｉ畹穆?lián)系極為密切，其內(nèi)容多處體現(xiàn)了生命美、科學美等美學因素。在大力推行素質(zhì)教育的環(huán)境下，從美育的視角來審視當前的生物學教學，并將美育與生物學學科教育相互滲透、融合，勢必將提高生物學教學的質(zhì)量，同時能夠在培養(yǎng)具備生物科學素養(yǎng)的人才過程中促進學生的全面發(fā)展，進而有助于素質(zhì)教育目標的實現(xiàn)。本文在確定研究的背景、意義基礎上，對國內(nèi)外美育研究狀況進行闡述，分析了美育在初中生物學教學中實施的必要性和可行性，進而確立本研究的研究理論基礎和研究內(nèi)容。研究在美育理論和實踐探究的基礎上，采用問卷調(diào)查法，以開封市教師作為研究對象調(diào)查了開封市初中生物教師對美育的關(guān)注度及教學中美育的實施現(xiàn)狀等，揭示出當前開封市初中生物學教學中審美教育滲透頻率較小。教師普遍能夠認識到美育對青少年的健康成長有重要作用，但是由于教師觀念不適應，教學任務繁忙等原因在日常教學中少有滲透美育。同時，本研究對開封市某中學七年級四個班級的學生，共191人，進行了歷時五個月的具體教學實踐。在實踐過程中從教學環(huán)境美、教師的審美素養(yǎng)、初中生物學滲透美育教學策略、教學內(nèi)容審美視點四個方面進行初中生物學的美育滲透。在教學環(huán)境美方面，引導學生關(guān)注校園環(huán)境和教室環(huán)境的美化。在教師審美方素養(yǎng)面，教師注重在語言，教態(tài)、板書、教學機智等方面營造美的氛圍。在教學內(nèi)容審美視點方面，依據(jù)生物學中美的表現(xiàn)形式和存在形態(tài)，找尋出每節(jié)課教學內(nèi)容的審美點，從美育的視角下對北師大版七年級上冊教材教學內(nèi)容進行組織。在初中生物學滲透美育教學策略方面，在情感態(tài)度價值觀目標中充分展現(xiàn)美育目標，在教學過程中運用了生物美與形象化教學、科學美與啟發(fā)式教學、生活應用美與體驗式教學、創(chuàng)造美與情感化教學等審美化教學策略。研究在七年級生物學教學中滲透美育進行實踐教學，并以學生為研究對象采用單組實驗法，將學生在進行生物學中滲透美育前后對生物學的學習興趣、情感體驗、價值觀等方面的變化展開進一步的調(diào)查。通過對學生實施具體的美育實踐教學，并對所得調(diào)查數(shù)據(jù)進行分析，本研究發(fā)現(xiàn)在實施美育教學后，教學中情感態(tài)度價值觀目標能夠較好地實現(xiàn)，學生對生物的學習興趣有所提高，在生物課上情感體驗更加愉悅，能夠更好的樹立審美價值觀，領(lǐng)悟美的能力有所增加，日常行為習慣能夠進一步改善。