AsFMT和AtNSP1蛋白的結構生物學研究.pdf

1、由于木質素的普遍存在，在工業(yè)生產(chǎn)尤其生物能源的產(chǎn)出中，植物很難被分解并加以利用。為更好地利用植物，降低工業(yè)生產(chǎn)的能量消耗，改造木質素使其更容易被化學解聚成為熱門的研究方向。最新的研究發(fā)現(xiàn)，木質素單體-阿魏酸鹽轉移酶(FMT)可以在楊樹的木質素多聚物中引入酯鍵，從而使木質素更容易被分解利用，減少能耗，具有良好的應用前景。實驗證明，從當歸中提取DNA，克隆得到AsFMT相關基因，并把該基因轉到植物的基因組中，最終合成的木質素中含有阿魏酸。<

2、br>　　本論文成功構建了關于AsFMT(1-441aa)的克隆，通過將蛋白連接GST標簽，成功使其在大腸桿菌內(nèi)進行表達。通過對表達的蛋白的純化，獲得了AsFMT的蛋白。通過結晶實驗，我們最終獲得八個可供晶體生長的池液條件，經(jīng)過一系列的晶體優(yōu)化，獲得了較高質量的蛋白晶體。
　　本論文的另一部分是關于擬南芥NSP1蛋白的結構生物學研究，十字花科植物中有一種重要的次生代謝產(chǎn)物硫苷，黑芥子酶水解硫苷，硫苷水解過程與一些指示蛋白相關，不同

3、指示蛋白存在時其代謝產(chǎn)物不同，到目前為止，已鑒定的指示蛋白包括表面活化蛋白(ESPs)，硫氰酸鹽形成蛋白(TFPs)和腈標記蛋白(NSPs)，只有NSP的結構和催化機理尚未解決。本文對AtNSP1蛋白的結構和功能進行研究，構建了pET-22b(+)為載的重組質粒，利用原核生物大腸桿菌表達系統(tǒng)表達出目的蛋白后進行晶體篩選，得到高質量晶體后通過X射線衍射數(shù)據(jù)結合分子置換進行分析，目前已得到分辨率為3.02(A)的蛋白質三維結構，分子對接揭示