CYP2S1基因?qū)θ私Y(jié)直腸癌SW480細胞增殖及遷移的影響.pdf

1、結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是全世界范圍內(nèi)最常見的腫瘤之一，在過去的幾十年，由生活環(huán)境、飲食習慣等因素的改變，其發(fā)病率逐年上升且有年輕化趨勢。盡管手術(shù)切除是治愈結(jié)直腸癌的主要手段，但是不良預后仍然是難以解決的問題，依然有超過40％的結(jié)直腸癌患者最終死于腫瘤轉(zhuǎn)移。因此尋求一種改善不良預后的有效治療方法顯得尤為重要。CYP2S1是 CYP450家族的一種單加氧酶，位于19q13.1，共包含9個外顯子。CYP2S1參

2、與內(nèi)源性或外源性致癌物的新陳代謝從而維持機體穩(wěn)定。本實驗利用shRNA特異性沉默人結(jié)直腸癌SW480細胞中CYP2S1基因，構(gòu)建穩(wěn)定沉默CYP2S1基因的細胞系。通過檢測其增殖和遷移情況，探討CYP2S1對細胞增殖及遷移的影響。使用不同濃度奧沙利鉑誘導SW480細胞，檢測奧沙利鉑對CYP2S1表達量及細胞增殖的影響。本研究包括以下兩個部分：
　　1.CYP2S1基因?qū)Y(jié)直腸癌SW480細胞增殖及遷移的影響
　　通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

3、法獲得穩(wěn)定沉默CYP2S1基因的細胞系，采用Western blot和Q-PCR檢測CYP2S1基因的沉默效率；臺盼藍計數(shù)法、CCK-8法和克隆形成實驗檢測CYP2S1基因?qū)毎鲋车挠绊?；劃痕實驗和transwell實驗檢測CYP2S1基因?qū)毎w移的影響。結(jié)果顯示，與野生型細胞相比，轉(zhuǎn)染組細胞增殖及遷移的速度加快，進一步研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染組細胞中β-catenin表達量有所上升。據(jù)此推測，CYP2S1的表達量的下調(diào)可能會導致Wnt/β-

4、catenin信號通路中β-catenin的積累，進而促進細胞增殖及遷移。
　　2.奧沙利鉑對結(jié)直腸癌SW480細胞增殖的影響
　　通過CCK-8法檢測不同濃度奧沙利鉑對 SW480細胞增殖的抑制作用，使用Western blot檢測奧沙利鉑對CYP2S1基因表達量的影響。結(jié)果顯示，隨誘導時間的延長或藥物濃度的增加，奧沙利鉑對SW480細胞的抑制作用逐漸增強，呈時間-濃度依賴性。與野生型細胞相比，奧沙利鉑誘導后細胞CYP2S