結(jié)直腸癌H-,2-受體的表達(dá)及其拮抗劑對SW480細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究H2受體在結(jié)直腸癌的表達(dá)及意義，及研究H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁對人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖的影響，誘導(dǎo)其凋亡的作用，探討H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁抗腫瘤作用機(jī)制。 方法：采用S-P免疫組化法檢測H2受體在結(jié)直腸癌的表達(dá)及細(xì)胞S-P免疫組化法檢測H2受體在SW480細(xì)胞的表達(dá)；采用細(xì)胞活力檢測、細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT法觀察H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁對SW480細(xì)胞的生長抑制作用；采用倒置顯微鏡、光鏡觀察西咪

2、替丁、尼扎替丁對SW480細(xì)胞形態(tài)的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測西咪替丁、尼扎替丁對SW480細(xì)胞凋亡和周期分布的影響。 結(jié)果： 1.60例結(jié)直腸癌H2受體陽性表達(dá)率為86.667％；而60例結(jié)直腸癌癌旁組織陽性表達(dá)率為11.667％；20例非大腸癌患者正常結(jié)腸組織H2受體陽性表達(dá)率為5.0％。這表明H2受體在結(jié)直腸癌組織標(biāo)本上高表達(dá)，其陽性表達(dá)率較癌旁組織、正常組織表達(dá)要高(P<0.01)，差異有顯著性。結(jié)直腸癌組織H2

3、受體陽性表達(dá)率中低分化型較高分化型要高(P<0.05)。 2.人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞H2受體陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，陽性信號呈棕黃色或黃色顆粒狀；這表明H2受體在SW480細(xì)胞株上存在陽性表達(dá)。 3. MTT比色法測定結(jié)果顯示，2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM西咪替丁對SW480細(xì)胞增殖的抑制率分別為11.31％、24.87％、44.93％、64.19％、89.06％；1.25μM、2.5

4、μM、5μM、10μM、20μM尼扎替丁對SW480細(xì)胞增殖的抑制率分別為14.51％、31.36％、47.12％、62.95％、87.89％；不同濃度H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁對SW480細(xì)胞作用24小時(shí)后具有明顯的抑制增殖效應(yīng)，呈劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。 4. SW480細(xì)胞對照組細(xì)胞群體倍增時(shí)間為34.42h；當(dāng)西咪替丁濃度由0μM增至10μM時(shí)，其細(xì)胞群體倍增時(shí)間由34.42h延長到67.44h(P<0.01)；尼扎替

5、丁濃度由0μM增至5μM時(shí)，其細(xì)胞群體倍增時(shí)間由34.42h延長到61.34h(P<0.01)。這表明SW480細(xì)胞經(jīng)H2受體拮抗劑作用24小時(shí)后，細(xì)胞群體倍增時(shí)間明顯延長，細(xì)胞增殖周期延長，細(xì)胞增殖速度減慢(P<0.01)。 5. 在光鏡和倒置相差顯微鏡下，與對照組相比，經(jīng)姬姆薩染色觀察，西咪替丁、尼扎替丁處理的SW480細(xì)胞，先發(fā)生皺縮，體積變小，異形性減少，細(xì)胞變圓數(shù)目增多，細(xì)胞核變小，染色變淡，核仁數(shù)量減少，部分可見染色

6、質(zhì)邊集現(xiàn)象；細(xì)胞間連接疏松，隨后部分變圓細(xì)胞浮起。40μM西咪替丁及20 Μm尼扎替丁連續(xù)處理3天后，SW480細(xì)胞全部變圓，細(xì)胞核碎裂，固縮微核形成，部分不再貼壁。 6. 流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，H2受體拮抗劑西咪替丁對SW480細(xì)胞作用24小時(shí)后的凋亡率呈劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系，并隨著西咪替丁藥物濃度提高，與空白和溶媒對照組相比，SW480細(xì)胞G2/S期細(xì)胞減少，G1期細(xì)胞增多趨勢較為明顯(P<0.01)，出現(xiàn)細(xì)胞周期G1期阻滯,并

7、且促進(jìn)G1期細(xì)胞凋亡。尼扎替丁對SW480細(xì)胞作用24小時(shí)后的凋亡率呈劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系，而且隨著尼扎替丁藥物濃度提高，SW480細(xì)胞S期細(xì)胞減少，G1/G2期細(xì)胞增多趨勢較為明顯(P<0.01)，出現(xiàn)細(xì)胞周期G1/G2期阻滯，并且促進(jìn)兩期細(xì)胞凋亡。 結(jié)論： 1.H2受體在結(jié)直腸癌組織有表達(dá)；結(jié)直腸癌組織H2受體在中低分化類型中陽性表達(dá)率較高分化類型陽性表達(dá)要高。 2.H2受體在人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株上存在