醋酸甲羥孕酮誘導結(jié)腸癌SW480細胞凋亡及其差異表達蛋白分析.pdf

1、建立醋酸甲羥孕酮（medroxyprogesterone acetate，MPA）誘導的人結(jié)腸癌SW480細胞凋亡模型，運用比較蛋白質(zhì)組學分析鑒定細胞凋亡前后的差異表達蛋白質(zhì)，從蛋白表達水平為進一步闡明MPA誘導結(jié)腸癌細胞發(fā)生凋亡的機理提供新的實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.采用醋酸甲羥孕酮誘導SW480細胞凋亡。通過MTT、流式細胞技術(shù)分析細胞抑制率，選擇合適的藥物濃度和誘導時間；透射電子顯微鏡觀察用藥前后亞細胞結(jié)

2、構(gòu)的改變、細胞周期和凋亡檢測對凋亡結(jié)果進行驗證，構(gòu)建凋亡模型。
　　 2.采用雙向電泳技術(shù)分離MPA處理組和對照組SW480細胞全蛋白，PDQUEST8.0軟件分析二維凝膠電泳圖譜，篩選出SW480細胞凋亡前后的差異蛋白點，胰酶酶解，HPLC-Chip/MS在線分析、鑒定差異表達蛋白點。
　　 3.使用Mascot軟件在UniProtKB/SWISS-PORT數(shù)據(jù)庫中搜索鑒定差異表達蛋白，生物信息學分析，得到差異蛋白的相

3、關(guān)肽段的MS/MS質(zhì)譜圖。
　　 結(jié)果：
　　 1.不同濃度的MPA對結(jié)腸癌SW480細胞的增殖有明顯的抑制和誘導凋亡作用，半數(shù)抑制濃度約為50μmol/L。細胞周期分析表明MPA誘導結(jié)腸癌細胞凋亡的作用可能與細胞周期的阻滯相關(guān)，此阻滯作用具有劑量依賴性。50μmol/LMPA處理細胞48h后，透射電鏡觀察可見：細胞核固縮、碎裂，染色質(zhì)高度濃縮，并出現(xiàn)趨邊凝集，有大量凋亡小體形成。
　　 2.雙向電泳技術(shù)分離凋亡

4、前后的SW4.80細胞全蛋白，PDQUEST軟件比對，篩選5個表達有差異的蛋白斑點，HPLC-Chip/MS分析鑒定，發(fā)現(xiàn)有2個蛋白在凋亡組表達上調(diào)，5個蛋白在凋亡組下凋。分別是Ubiquitin、LMO3、HSP10、Solute carrier family22 member11、UCHL2、NDPK-A、Lamimn receptor1等7種SW4180細胞凋亡相關(guān)蛋白。
　　 結(jié)論：
　　 MPA可誘導人結(jié)腸癌S