二烯丙基二硫體內外抑制人結腸癌SW480細胞增殖及機制研究.pdf

1、第一部分：DADS體外對人結腸癌SW480細胞　　生長抑制作用的研究目的：研究二烯丙基二硫(DADS)體外抑制人結腸癌SW480細胞增殖并探討其作用機理。方法：采用MTT、細胞計數(shù)、細胞活力檢測，觀察DADS對人結腸癌SW480細胞的生長抑制作用；光鏡和電鏡觀察DADS對SW480細胞形態(tài)的影響；流式細胞術檢測DADS對SW480細胞周期分布的影響；免疫細胞化學圖像定量分析檢測細胞PCNA、p53、p21WAF1、Bcl-2及Bax蛋

2、白表達的變化。結果：不同濃度DADS(30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/m1)對SW480細胞(24h、48h、72h、96h)具有明顯的生長抑制效應，并呈劑量-效應和時間-效應依賴關系(P＜0.05)；DADS濃度從30μg/ml增加到70μg/ml時，細胞群體倍增時間由34.50h延長至94.74h(P＜0.05)；細胞活力檢測結果顯示，對照組與DADS各濃度處理組細胞存活率差異無顯著性(P＞

3、0.05)；光鏡、電鏡結果顯示，與對照組比較，處理組瘤細胞稀疏，數(shù)量明顯減少，細胞異型性變小，形態(tài)較為一致，細胞以圓形為主，細胞小，胞漿較豐富，核變小，大小較為一致，核漿比例變小，核仁不明顯，胞漿內細胞器豐富，可見粘液空泡，胞核及部分細胞器呈退行性變，部分瘤細胞核固縮，深染，染色質成塊聚集，呈凋亡形態(tài)學改變；SW480細胞隨DADS處理濃度的增加和處理時間的延長，G0/G1期細胞含量逐漸減少，G2/M期細胞含量逐漸增加，并出現(xiàn)較高的亞二

4、倍體峰(P＜0.05)；免疫細胞化學圖像定量分析結果顯示，50μg/mlDADS處理SW480細胞48h后，p53、PCNA、Bcl-2蛋白表達減弱，p21WAF1、Bax蛋白表達增強，與對照組比較，差異有顯著性意義(P＜0.05)。結論：1.DADS對體外培養(yǎng)的SW480細胞具有明顯的增殖抑制作用。2.DADS能使SW480細胞阻滯在G2/M期，并具有誘導其凋亡的作用。3.DADS可能通過p53、PCNA、Bcl-2蛋白表達下調，p2

5、1WAF1、Bax蛋白表達上調，阻滯癌細胞于G2/M期，抑制SW480細胞增殖?！　〉诙糠郑篋ADS對裸鼠體內人結腸癌SW480細胞抑制增殖的實驗性研究 目的：通過建立人結腸癌SW480細胞裸鼠移植瘤模型，研究DADS對裸鼠體內人結腸癌SW480細胞增殖，DADS體外處理后SW480細胞致瘤性的影響及DADS對結腸癌裸鼠移植瘤的預防和治療作用，并初步探討其作用機理。方法：建立人結腸癌SW480細胞裸鼠移植瘤模型，20只實驗裸

6、鼠分為四組，即對照組、治療組、預防組和體外處理組。體外處理組接種50μg/mlDADS處理48h后的SW480細胞，對照組、治療組、預防組移植未處理的SW480細胞。預防組移植后次日起隔日腹腔注射給藥，治療組成瘤后隔日腹腔給藥，對照組成瘤后隔日腹腔注射生理鹽水。測裸鼠體重和移植瘤體積，觀察移植瘤生長情況。處死后，稱瘤重、測體積，計算抑瘤率；光鏡、電鏡觀察移植瘤形態(tài)變化；流式細胞術檢測移植瘤細胞周期分布；免疫組織化學圖像定量分析檢測細胞P

7、CNA、p53、p21WAF1、Bcl-2及Bax蛋白表達的變化。結果：成功的建立了人結腸癌SW480細胞裸鼠移植瘤模型。對照組成瘤率100％，平均瘤重4.071g，人結腸癌SW480細胞經DADS體外處理后，其致瘤性明顯降低，成瘤率40％，平均瘤重0.503g，瘤重抑瘤率87.64％，與對照組差異有顯著性意義(P＜0.05)；DADS在體內對人結腸癌的發(fā)生具有預防作用，成瘤率為60％，平均瘤重0.776g，抑瘤率80.94％，與對照組

8、差異有顯著性意義(P＜0.05)；治療組平均瘤重1.512g，抑瘤率62.86％，與對照組差異有顯著性意義(P＜0.05)；與對照組相比，各處理組移植瘤細胞異型性降低，癌巢較清楚，可見腺樣結構，癌細胞大小較均勻，胞漿內細胞器豐富，核形狀較規(guī)則，核質比下降，核分裂相減少，部分癌細胞核固縮，膜結構仍完整，呈凋亡早期改變，可見典型凋亡小體形成。移植瘤細胞周期阻滯在G2/M期，并且出現(xiàn)較高的亞二倍體峰(P＜0.05)，各處理組之間差異無顯著性；

9、免疫組織化學與圖像定量分析結果顯示，各處理組與對照組比較，裸鼠移植瘤組織p53、PCNA、Bcl-2蛋白表達減弱，而p21WAF1、Bax蛋白表達增強，與對照組差異有顯著性意義(P＜0.05)。DADS處理組裸鼠的體重、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素氮、肌酐與對照組相比，差異均無顯著性意義(P＞0.05)，肝臟、肺臟、腎臟、骨髓與正常組織的形態(tài)結構較一致，均無明顯的病理變化，表明DADS對裸鼠無明顯的毒副作用。結論：1.DADS可明顯降低