M-01解淀粉芽孢桿菌的分離純化鑒定及其生態(tài)培養(yǎng)生長(zhǎng)規(guī)律的研究.pdf

1、本研究對(duì)從東北地區(qū)自行采集的菌株進(jìn)行了分離、純化、培育，并進(jìn)行了相關(guān)的分子生物學(xué)技術(shù)鑒定和相關(guān)酶活力變化規(guī)律的研究。利用自行研制的智控益生菌液體發(fā)酵器和智控固體生態(tài)培養(yǎng).干燥一體機(jī)對(duì)菌株進(jìn)行了液體發(fā)酵與固體生態(tài)培養(yǎng)及干燥一體化研究，探尋了其相關(guān)指標(biāo)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，測(cè)試智控固體生態(tài)培養(yǎng).干燥一體機(jī)的運(yùn)行效果，為其工廠規(guī)?；a(chǎn)應(yīng)用提供了必要的技術(shù)參考，具有較好的理論應(yīng)用價(jià)值。研究結(jié)果如下:
　　(1)對(duì)自行采集分離純化的M-01菌株進(jìn)

2、行了形態(tài)學(xué)研究和生理生化測(cè)定，并采用16SrDNA測(cè)序以及gyrA基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹分析技術(shù)對(duì)菌株進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定，鑒定結(jié)果:M-01菌株為解淀粉芽孢桿菌(M-01，Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)，屬于好氧菌。
　　(2)在18℃、pH7.2條件下，對(duì)M-01菌株進(jìn)行分泌淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶酶活力動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的研究，結(jié)果表明:M-01菌淀粉酶活力68h時(shí)，達(dá)到較高水平1

3、3.02U/dL;蛋白酶活力在56h后趨于穩(wěn)定，至74h時(shí)為8.04U/dL;脂肪酶活力在56h時(shí)達(dá)到峰值，為1.159U/L。
　　(3)利用自行研制的智控益生菌液體發(fā)酵器對(duì)M-01菌進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，在適宜的液體發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)底物組成和接種量條件下，合理有效控制發(fā)酵液溫度35±0.2℃，初始pH值7.2±0.1以及氣體攪拌方式等發(fā)酵條件，結(jié)果表明:M-01菌經(jīng)24h液體發(fā)酵，活菌數(shù)為146.675±4.05×108CFU/mL，芽孢

4、率為91.76±1.50％;在整個(gè)發(fā)酵過程中，發(fā)酵液pH值呈下降趨勢(shì)，發(fā)酵液中還原糖含量呈下降趨勢(shì)，至24h時(shí)，還原糖含量為5.857±0.314mg/mL;在發(fā)酵前期0-4h，發(fā)酵液中氨基氮含量增高，4-24h期間，發(fā)酵液中氨基氮含量逐漸降低，與此同時(shí)，在整個(gè)發(fā)酵過程中微生物總蛋白(MCP)含量呈現(xiàn)持續(xù)上升趨勢(shì)。
　　(4)通過L9(33)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究培養(yǎng)溫度、菌料濕度、作用時(shí)間3因素對(duì)固體生態(tài)培養(yǎng)28h后的M-01菌芽孢

5、形成率的影響，結(jié)果表明:各因素對(duì)M-01菌芽孢形成率影響的主次順序?yàn)?培養(yǎng)溫度＞菌料濕度＞培養(yǎng)時(shí)間。故在M-01菌固體發(fā)酵培養(yǎng)28h后，促進(jìn)芽孢率形成的影響因素的最佳組合為A1B3C2，即培養(yǎng)溫度45℃，菌料濕度55％，培養(yǎng)時(shí)間2h。
　　(5)采用自行研制的智控固體生態(tài)培養(yǎng).干燥一體機(jī)對(duì)M-01菌進(jìn)行固體生態(tài)培養(yǎng)及溫敏干燥效果的研究，自動(dòng)控制發(fā)酵溫度35℃±1.0℃，菌料濕度55％±5％，并調(diào)節(jié)菌料初始pH7.2±0.1，根據(jù)正

6、交設(shè)計(jì)結(jié)果，采用分階段固體發(fā)酵培養(yǎng)，第一階段0-28h固體培養(yǎng)，控制發(fā)酵溫度35℃±1.0℃，菌料濕度55％±5％，發(fā)酵培養(yǎng)28h，以獲得較高的活菌數(shù);第二階段28-30h固體培養(yǎng)，提高發(fā)酵溫度至45℃，維持培養(yǎng)2h，以刺激芽孢的形成，以獲得較高芽孢數(shù)。結(jié)果表明:至30h時(shí)，菌質(zhì)中活菌數(shù)為224.25±4.47×108CFU/g，芽孢數(shù)為203.63±4.51×108CFU/g，芽孢形成率為90.8±0.73％。在自行研制的智控固體生態(tài)