探索MicroRNA-206治療BPD小鼠效果.pdf

1、目的:
　　探討miR-206對(duì)高氧導(dǎo)致昆明白色小鼠BPD的干預(yù)效果。
　　方法:
　　小鼠持續(xù)暴露于高濃度氧環(huán)境建立BPD小鼠模型，預(yù)定4窩剛出生昆白小鼠，分為高氧對(duì)照組（O2）、高氧miR-206處理組（206）、高氧空白質(zhì)粒對(duì)照組（NC）和空氣對(duì)照組（Air），隨機(jī)分配，每組約8只，高氧環(huán)境的3組小鼠共養(yǎng)于同一養(yǎng)殖箱內(nèi)，氧氣濃度維持在80％左右。生后每周稱體重并觀察記錄小鼠一般狀態(tài)；生后第20日齡開(kāi)始高氧miR-

2、206處理組、高氧空白質(zhì)粒對(duì)照組開(kāi)始干預(yù)治療和干預(yù)對(duì)照處理共2周療程，最后一次治療3天后于小鼠苯巴比妥鈉麻醉，進(jìn)行眼眶采血，離心取血清保存于-80℃。開(kāi)胸取肺，對(duì)稱部位取肺組織分別保存標(biāo)本于4%多聚甲醛溶液、液氮、-20℃冰箱。試驗(yàn)中主要應(yīng)用的試驗(yàn)方法有肺組織石蠟切片HE染色、馬森三色染色、輻射狀肺泡計(jì)數(shù)(radial alveolar counts，RAC)及ELISA、Real-time PCR和肺組織冰凍切片免疫熒光等技術(shù)。

3、>　　結(jié)果:
　　1.重組 mmu-miR-206質(zhì)粒經(jīng)尾靜脈高壓注射入小鼠體內(nèi)后，RT-PCR檢測(cè)肺組織miR-206的mRNA表達(dá)，與NC組和O2組相比206組miR-206 mRNA表達(dá)增加， P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。證明本實(shí)驗(yàn)該外源基因成功導(dǎo)入。
　　2.206組較NC組和O2組小鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，但206組小鼠離氧后活動(dòng)耐力較NC組和O2組好； miR-206組與Air組相比肺濕重高、干濕重比低，但與NC

4、組和O2組相比肺濕重明顯下降、干濕重比較高，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肺組織病理切片觀察發(fā)現(xiàn)：NC組和O2組肺泡大小不等，肺泡間隔炎細(xì)胞浸潤(rùn)、增寬，甚至呈塊狀，臟膜下炎性反應(yīng)明顯，甚至有纖維化傾向；Air組織結(jié)構(gòu)正常、肺泡大小均一，無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)；206組較NC組和O2組炎性反應(yīng)低，臟膜下無(wú)明顯炎性反應(yīng)，但馬森三色染色顯示肺間質(zhì)膠原蛋白沉積物無(wú)明顯差異。
　　3.206組小鼠血清IL-6、TGF-β濃度較NC組低，P＜0.05

5、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PCR試驗(yàn)顯示FN1基因的mRNA表達(dá)下降，而免疫熒光顯示FN1的蛋白表達(dá)量無(wú)明顯下降。
　　結(jié)論：
　　本研究小鼠尾靜脈注射重組質(zhì)粒mmu-mir-206，使小鼠肺組織miR-206表達(dá)上調(diào)，通過(guò)下調(diào)前炎性因子IL-6水平抑制炎癥反應(yīng)擴(kuò)大，并進(jìn)一步使FN1基因的mRNA表達(dá)下降，分子水平上顯示肺纖維化有改善趨勢(shì)。因干預(yù)治療起始時(shí)間遲和持續(xù)治療時(shí)間短，病理組織結(jié)構(gòu)上尚無(wú)得到明顯改善，可能說(shuō)明miR-206