石榴皮安石榴苷的制備及其亞急性毒性實驗和肝毒性機制的初步研究.pdf

1、目的：1.考察石榴皮多酚提取物亞急性毒性，初步評價其安全性，為長期毒性實驗的劑量設(shè)計提供依據(jù)。2.通過HPLC指紋圖譜方法，對喀什和田兩地不同批次的石榴皮藥材進行相似度分析。3.通過純化工藝制備石榴皮安石榴苷精制物。4.石榴皮安石榴苷精制物對 LDLr-/-小鼠給藥三個月的毒性考察。5.初步探討石榴皮安石榴苷精制物致膽汁淤積型肝毒性的機制。
　　方法：1.石榴皮多酚提取物給藥30 d，記錄各組小鼠的一般活動情況、監(jiān)測體重、食物消耗

2、量及毒性反應(yīng)，給藥末期禁食24 h剖殺2/3的小鼠，剩余小鼠恢復(fù)觀察2W后剖殺。檢測給藥期和恢復(fù)期小鼠的血液學(xué)指標(biāo)及生化指標(biāo)，HE染色觀察肝臟形態(tài)學(xué)變化。2.對HPLC指紋圖譜方法的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性進行考察，對喀什和田兩地不同批次的石榴皮藥材進行相似度分析。3.篩選喀什和田兩地的石榴皮藥材，進行安石榴苷的制備并通過 HPLC檢測安石榴苷含量。4.石榴皮安石榴苷精制物對LDLr-/-小鼠3個月毒性實驗，監(jiān)測體重，解剖時對臟器外觀大體

3、觀察，檢測生化指標(biāo)，病理組織學(xué)檢查。5.QRT-PCR法探討膽汁轉(zhuǎn)運受體的MRP-3、BESP、MRP-2、CYP7A1、PPARα五項經(jīng)典的轉(zhuǎn)運通路mRNA表達量。
　　結(jié)果：1.亞急性毒性試驗期間，各組小鼠生長活動正常。給藥期結(jié)束時，各劑量組小鼠體重增重、食物利用率與空白對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；血液學(xué)指標(biāo)及血生化指標(biāo)均無顯著特異性的差異。給藥末期各劑量組與空白對照組小鼠的肝臟系數(shù)比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P

4、<0.01），而恢復(fù)期觀察中只有中、高劑量組小鼠的肝臟系數(shù)與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），在恢復(fù)期肝臟病理切片觀察中高劑量組小鼠肝臟有毒性表現(xiàn)，即肝細胞點狀壞死伴炎癥細胞的反應(yīng)，可見部分肝小葉中央靜脈輕度擴張并淤血，肝竇內(nèi) kuffer細胞明顯增生，匯管區(qū)可見炎癥細胞浸潤。2.石榴皮藥材指紋圖譜，方法學(xué)驗證結(jié)果表明石榴皮藥材HPLC指紋圖譜精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均符合要求，12批石榴皮藥材相似度較高，不同石榴皮藥材在化

5、學(xué)成分的組成上基本一樣。3.喀什石榴皮藥材所含安石榴苷成分略高于和田石榴皮，相同工藝用喀什石榴皮制備的安石榴苷含量均在80％以上。4.石榴皮安石榴苷精制物給藥3個月后，病理組織學(xué)檢查中 HFD+PU=500mg/kg·d劑量組、HFD+PU=750mg/kg·d劑量組的小鼠肝臟顯示膽汁淤積型肝損傷。5.QRT-PCR實驗中BESP的mRNA表達量顯示下調(diào)，MRP2的mRNA表達量顯示下調(diào)，MRP3的mRNA表達量顯示上調(diào)，CPY7A1的

6、mRNA的表達量顯示下調(diào)，PPARα的mRNA的表達量顯示上調(diào)。
　　結(jié)論：石榴皮多酚提取物亞急性毒性實驗中高劑量下表現(xiàn)肝毒性?？κ埠吞飪傻馗髋蔚氖衿に幉南嗨啤？κ彩衿ぐ彩褴蘸烤?0%高于和田石榴皮藥材的安石榴苷含量。石榴皮安石榴苷干預(yù)LDLr-/-小鼠3個月，在肝臟病理切片中，高劑量組HFD+PU=500mg/kg·d組和HFD+PU=750mg/kg·d組表現(xiàn)出膽汁淤積型肝損傷。對石榴皮安石榴苷致膽汁淤積肝損傷機制