S100A14和S100A16影響卵巢癌耐藥細胞生物學行為的初探.pdf

1、目的:卵巢癌是女性婦科腫瘤中較常見的惡性腫瘤，分化程度低，深度浸潤和轉移是導致患者預后差的主要原因。治療卵巢癌的首選方案是手術切除腫瘤細胞后并進行藥物化療實時監(jiān)測。但是隨著化療的進行，腫瘤細胞會逐漸的產生耐藥性，影響治療效果，進而大大降低了術后患者的生存時間。研究顯示，使卵巢癌發(fā)生耐藥的因素包括:作用在癌旁組織的藥物濃度下降、靶向接觸藥物的位點異常、DNA受損后難以正?；謴?、調控凋亡途徑的相關基因突變等均與卵巢癌抗藥相關。因此，明確卵巢

2、癌的耐藥機制是改善卵巢癌患者術后生存率的關鍵。
　　S100蛋白家族是一類分子量較小的Ca2+結合蛋白家族，介于9-13kDa之間，在硫酸銨中易溶解，是EF手摸序結構。其家族成員在組織中的表達具有特異性。S100家族成員較多，不同的成員之間在不同的組織中其功能也不盡相同。S100家族成員中的S100A14，含有4個外顯子，3個內含子，能夠編碼104種氨基酸，位置在染色體的1q21.3，由于染色體的頻繁重組和放大，從而導致對S100

3、A14的表達缺失，S100A14可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉移和侵襲、以及患者的預后相關。S100A16的自身特性與其他S100家族成員不同。結構上，在C端S100A16由高度保守的12個氨基酸構成，與S100家族中大部分成員EF端相一致。但在N端位置缺少谷氨酸鹽殘基和由氨基酸組成的loop環(huán)，S100A16的獨特自身結構對于鈣的調節(jié)位點非常重要。
　　利用基因芯片篩選，我們發(fā)現S100A14和S100A16在卵巢癌耐藥細胞中表達明顯

4、升高，推測可能與腫瘤耐藥相關。一些S100蛋白添加到細胞外，能夠引起相應的內源性蛋白易位。最近，S100蛋白成為主要的與一些疾病相關的因素，如炎癥、神經退行性病變及癌癥等。S100A14和S100A16是S100家族中的兩個成員，在多種腫瘤細胞中都呈現表達異常。S100A14基因在直腸癌和腎癌中的表達呈下調趨勢，而在膀胱癌、乳腺癌和子宮的惡性腫瘤中呈現上調趨勢。研究顯示，在多種卵巢癌細胞系中S100A14呈現高表達狀態(tài)，提示S100A1

5、4在治療卵巢癌耐藥方面可能是潛在標志分子。S100A16在乳腺癌、卵巢癌和肺癌中也呈高表達狀態(tài)。為了證明S100A14和S100A16與卵巢癌的耐藥特性以及其他生物學行為是否相關，我們進行了一系列的實驗研究。
　　S100A14和S100A16在卵巢癌敏感細胞中幾乎不表達，但是在卵巢癌耐藥細胞中呈高表達狀態(tài)。下調卵巢癌耐藥細胞的S100A14和S100A16的表達后，可以部分恢復耐藥細胞的藥物敏感性，同時也影響著卵巢癌耐藥細胞的增

6、殖、遷移、凋亡和周期。進一步的實驗結果提示S100A14和S100A16影響了卵巢癌耐藥細胞的耐藥性可能是通過Bax、Bcl-2、Bcl-xl、P-gp和GST-π途徑共同調控的。本研究的結果和結論表明，通過體外實驗研究探討了卵巢癌耐藥細胞的耐藥機制，為臨床上治療卵巢癌耐藥提供理論依據。
　　研究方法:1、培養(yǎng)不同的卵巢癌敏感細胞(A2780)和卵巢癌耐藥細胞(A2780/Tax)。2、利用siRNA轉染A2780/Tax，制備S

7、100A14和S100A16低表達的細胞系、陰性對照的A2780/Tax細胞系以及對照組A2780/Tax細胞系。3、應用MTT法檢測A2780和A2780/Tax細胞系耐藥特性。4、應用平板克隆、MTT檢測A2780/Tax細胞系的增殖特性。5、應用Transwell檢測A2780/Tax細胞系的細胞遷移。6、應用流式細胞分析儀檢測A2780/Tax細胞系的細胞凋亡和細胞周期。7、應用基因芯片篩選技術和實時定量PCR檢測A2780和A

8、2780/Tax細胞系的基因表達水平。8、應用Western blot檢測A2780和A2780/Tax細胞系的蛋白表達水平。
　　結果:1、利用RT-PCR、Western blot驗證S100A14和S100A16在卵巢癌敏感細胞中幾乎不表達，但在卵巢癌耐藥細胞中高表達。2、利用RT-PCR、Western blot證實轉染si-RNA后S100A14和S100A16在A2780/Tax的表達降低。3、敲低S100A14和S1

9、00A16后使A2780/Tax對紫杉醇的耐藥性降低。4、敲低S100A14和S100A16表達抑制A2780/Tax的增殖和遷移。5、敲低S100A14和S100A16表達促進細胞凋亡。6、敲低S100A14和S100A16表達，紫杉醇處理后G2/M期阻滯作用增強。
　　結論:在卵巢癌耐藥細胞中，S100A14和S100A16均呈高表達狀態(tài)，而在卵巢癌敏感細胞中卻幾乎不表達。下調S100A14和S100A16及兩者聯合下調后可以