SOS1對高轉(zhuǎn)移潛能卵巢癌Hey細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響及機(jī)制探究.pdf

1、目的：探討SOS1對高轉(zhuǎn)移潛能卵巢癌Hey細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響及機(jī)制。
　　方法：1.體外實驗：免疫熒光檢測 SOS1表達(dá)缺失的 Hey細(xì)胞（ Hey-SOS1i）、轉(zhuǎn)染陰性對照細(xì)胞（ Hey-NT）及空白對照細(xì)胞（Hey-WT）三組細(xì)胞形態(tài)、骨架蛋白、細(xì)胞偽足及細(xì)胞間排列情況；Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移、侵襲能力；粘附實驗檢測細(xì)胞與基質(zhì)間粘附；內(nèi)滲及外滲實驗反應(yīng)侵襲能力;MTT和平板克隆檢測細(xì)胞生長，同時檢測細(xì)胞周期

2、和凋亡。2.體內(nèi)實驗：構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型及腹腔種植轉(zhuǎn)移模型，體內(nèi)驗證生長及轉(zhuǎn)移情況。3.機(jī)制探究：1定量PCR檢測E鈣黏蛋白、N鈣黏蛋白、波形蛋白、MMP9、MMP2、snail、twist、Slug的RNA表達(dá)；2.Western Blot檢測上述蛋白及調(diào)控EMT的信號通路中關(guān)鍵蛋白表達(dá)；3.免疫熒光檢測snail的細(xì)胞核定位。
　　結(jié)果：1.與Hey-NT、Hey-WT細(xì)胞相比，Hey-SOS1i細(xì)胞失去極性，骨架蛋白稀疏

3、、排列較紊亂，細(xì)胞突出的偽足減少而細(xì)胞之間排列緊密；遷移(90.00±2.45 vs.274.67±8.18 vs.254.00±2.16, P<0.01)、侵襲細(xì)胞數(shù)減少（24.00±1.25 vs.112.33±2.54 vs.102.00±8.94, P<0.01）；細(xì)胞基質(zhì)粘附能力下降（0.31±0.10 vs.0.72±0.10 vs.0.69±0.13，P<0.05）；血管內(nèi)滲細(xì)胞數(shù)（13.00±1.63 vs.27.33±

4、1.24 vs.24.00±2.16，P<0.05）及外滲細(xì)胞數(shù)（9.00±2.16 vs.27.22±1.69 vs.32.33±1.05，P<0.05）顯著減少,細(xì)胞增殖能力及克隆形成率下降（013±0.10 vs.0.36±0.02 vs.0.41±0.06， P<0.05）；細(xì)胞增殖指數(shù)下降（0.36±0.01 vs.0.49±0.01vs.0.51±0.05， P<0.05）；總的凋亡細(xì)胞數(shù)較少，凋亡細(xì)胞比例（3.52％±0.

5、05%vs.5.64%±2.37% vs.3.11%±0.55%，P>0.05），及尾部面積（45.86±12.81vs.47.24±10.48 vs.43.58±14.01，P>0.05）無顯著差異。應(yīng)用腫瘤細(xì)胞構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型，種植35天后，Hey-SOS1i移植瘤體積和質(zhì)量（0.74±0.16cm3，0.73±0.20 g），均顯著低于Hey-NT組體積和質(zhì)量（2.18±1.46cm3，2.31±0.98g）（P<0.05）

6、。在腹腔種植模型中，腹腔注射腫瘤細(xì)胞5周后，Hey-SOS1i細(xì)胞在腹腔總的的轉(zhuǎn)移種植病灶數(shù)明顯下降（83.33±17.06 vs.49.33±5.65，P<0.05），主要表現(xiàn)為腸道及其系膜（58.67±10.53 vs.33.0±4.32，P<0.05）和橫膈（16.67±3.21 vs.10.33±0.58，P<0.05）轉(zhuǎn)移灶減少。與 Hey-NT、Hey-WT細(xì)胞相比， Hey-SOS1i細(xì)胞上皮標(biāo)志物 E鈣黏蛋白基因和蛋白表