卵巢癌原位-轉(zhuǎn)移模型的建立及高轉(zhuǎn)移潛能細胞株和相關(guān)差異基因篩選.pdf

1、第一部分卵巢癌原位-轉(zhuǎn)移模型的建立及高轉(zhuǎn)移潛能細胞株和相關(guān)差異基因篩選
　　背景:卵巢癌是死亡率最高的婦科惡性腫瘤。其中，又以上皮性卵巢癌為常見。卵巢癌的難治性主要有兩方面,早期不容易發(fā)現(xiàn)和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。大多數(shù)卵巢癌病人在診斷時常伴有轉(zhuǎn)移。與原發(fā)灶相比，轉(zhuǎn)移灶中的腫瘤細胞大多對常規(guī)治療手段并不敏感，容易引起卵巢癌進一步發(fā)展。因此較好的控制轉(zhuǎn)移病灶的癌細胞防止復(fù)發(fā)和進一步轉(zhuǎn)移，我們才有可能改變當前卵巢癌治療效果差的局面。
　　目的

2、：建立一個理想的卵巢癌生長和轉(zhuǎn)移小鼠模型，基本重現(xiàn)卵巢原位腫瘤形成及腹腔和其他遠隔器官轉(zhuǎn)移的整個經(jīng)過；利用該模型篩選得到具有穩(wěn)定遺傳性的高轉(zhuǎn)移潛能亞細胞株，最終通過芯片分析，獲取卵巢癌器官特異性轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，為臨床治療轉(zhuǎn)移提供參考依據(jù)。
　　方法：利用慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定表達兩種報告基因的卵巢癌細胞系 SKOV3–Luciferase/RFP；經(jīng)過流式分選篩選純化腫瘤細胞；利用活體成像系統(tǒng)跟蹤觀察小鼠體內(nèi)腫瘤生長轉(zhuǎn)移情況；利用基因芯

3、片檢測不同轉(zhuǎn)移特性亞細胞株基因表達情況，篩選出差異基因；實時定量PCR，western blot和免疫組化驗證差異基因表達。
　　結(jié)果：通過小鼠卵巢癌原位-轉(zhuǎn)移模型可以很好地觀察腫瘤細胞在小鼠體內(nèi)從卵巢原位擴散到其他部位的整個過程；利用原位-轉(zhuǎn)移模型經(jīng)過三次篩選，成功獲得分別具有腹腔和肺部高轉(zhuǎn)移能力的S系和L系細胞株；經(jīng)動物實驗驗證S系和L系細胞展現(xiàn)出不同程度的轉(zhuǎn)移能力增強以及轉(zhuǎn)移部位選擇性；基因芯片檢測結(jié)果顯示S系細胞表達升高的

4、基因在 L系細胞中表達水平一般，功能主要包括調(diào)控細胞增殖,遷移，血管生成和脂肪代謝等；L系細胞內(nèi)表達水平升高的基因功能主要集中于維持干細胞特性和調(diào)節(jié)細胞免疫等方面。
　　結(jié)論：構(gòu)建的卵巢癌原位-轉(zhuǎn)移模型有較好的穩(wěn)定性和可靠性；不同的選擇性轉(zhuǎn)移能力是因為亞細胞株攜帶有不同的轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，這些基因可以幫助腫瘤細胞適應(yīng)不同的組織微環(huán)境。靶向這些轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的治療，有可能通過抑制轉(zhuǎn)移發(fā)生和清除已經(jīng)轉(zhuǎn)移的卵巢癌細胞幫助提高治療效果，改善病人

5、預(yù)后。
　　第二部分綜述卵巢癌動物模型及轉(zhuǎn)移相關(guān)細胞分子機制研究進展
　　卵巢癌是最具致死性的婦科惡性腫瘤。其高死亡率主要是由于病人在診斷時就已經(jīng)是疾病晚期，嚴重限制了手術(shù)和化療的治療效應(yīng)。轉(zhuǎn)移在促進卵巢癌進展和降低生存率方面有著重要作用，但是迄今為止卵巢癌播散的機制尚不完全清楚。動物模型被廣泛用于腫瘤分子機制研究以及化療藥物的篩選評估。近些年興起的轉(zhuǎn)基因動物模型為探尋卵巢癌的起源和早期分子事件提供了可能。這篇綜述主要介紹不