結腸癌高轉移模型的篩選及細胞系的建立.pdf

1、選用人結腸癌細胞株，模擬臨床腫瘤術后復發(fā)，成功建立了裸小鼠人結腸癌術后轉移模型。選用小鼠結腸癌，通過體內篩選的方法成功建立了一個轉移率高、轉移穩(wěn)定、直觀性好、操作簡便的小鼠結腸癌高轉移模型并建立了相應的高轉移細胞系，并對它的一般生物學特性進行探討和研究，為結腸癌基礎與臨床研究及腫瘤轉移的分子機制提供適宜的實驗動物模型。結果如下： 1)建立裸小鼠人結腸癌術后轉移模型。人結腸腺癌細胞株HCT-116接種于裸小鼠右側背部近腋部皮下，獲

2、得皮下移植瘤源，然后采用組織塊法建立28只裸小鼠皮下移植瘤模型。4周后隨機挑選15只裸小鼠作為實驗組切除腫瘤組織，其余13只裸小鼠作為對照組，觀察動物生存情況及腫瘤遠處轉移情況。對照組裸小鼠9周時出現(xiàn)惡病質，解剖檢查肺轉移率為23﹪(3/13)；實驗組裸小鼠術部無腫瘤復發(fā)，17周后肺轉移率達到100﹪(15/15)，淋巴結轉移率100﹪(15/15)，脾臟轉移率33.3﹪(5/15)。本模型模擬了臨床腫瘤根除術后發(fā)生遠處轉移的過程，為研

3、究結腸癌轉移機制和術后抗轉移治療提供了理想的動物模型。 2)采用體內篩選的方法建立小鼠結腸癌高轉移模型。將C26小鼠結腸癌移植于T、B、NK免疫細胞缺陷的NOD-SCID小鼠皮下，通過皮下移植→肺轉移→皮下移植的體內篩選方法建立高轉移模型。再以相同的方法在BALB/c小鼠體內繼續(xù)篩選，同時進行腫瘤的生長和轉移情況觀察、病理組織學、超微結構、細胞增值周期和異倍體的觀察。NOD-SCID小鼠篩選5代后肺轉移達100﹪。但篩選后的腫瘤

4、組織皮下移植到BALB/c小鼠體內時，腫瘤的轉移程度有所下降，又經BALB/c小鼠體內4代篩選，腫瘤的移植成瘤率、肺轉移率均為100﹪。病理組織學、超微結構觀察、細胞增值周期和異倍體等結果表明與原結腸癌生物學特性相似。本研究建立了一個肺轉移率100﹪、轉移特性穩(wěn)定、直觀性好、操作簡便的小鼠結腸癌高移植模型，為系統(tǒng)性研究結腸癌轉移機制和臨床結腸癌治療提供了好的動物模型。 3)利用篩選成功的小鼠結腸癌高轉移腫瘤組織在體外建立一個具有

5、高轉移潛能的小鼠結腸癌細胞系，并對其一般生物學特性進行觀察。采用組織塊法對小鼠結腸癌高轉移腫瘤組織進行原代培養(yǎng)及建系，觀察腫瘤細胞的形態(tài)學、生長速度、體外侵襲能力、染色體核型、細胞周期變化、皮下移植的成瘤率和轉移情況。初步建立了一個具有高轉移潛能的人結腸癌細胞系，目前已傳至18代。細胞為典型的上皮樣細胞，倍增時間為31.8h，未篩選細胞倍增時間為32.5h。C26篩選與未篩選細胞的36h體外過膜數(shù)分別為(60.38±8.86)/高倍視野