膽囊癌肝轉(zhuǎn)移模型建立及高轉(zhuǎn)移細(xì)胞亞群的篩選.pdf

1、目的：建立膽囊癌肝轉(zhuǎn)移模型并通過模型篩選高轉(zhuǎn)移亞群細(xì)胞，為膽囊癌肝轉(zhuǎn)移研究提供良好的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)工具。 方法：GBC-SD細(xì)胞在含10％胎牛血清的RPMI1645體外培養(yǎng)、胰蛋白酶分離、生理鹽水制備細(xì)胞懸液1×107/ml，4到6周齡裸小鼠脾臟接種建立膽囊癌轉(zhuǎn)移模型；從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝轉(zhuǎn)移灶中分離腫瘤細(xì)胞，經(jīng)過原代、傳代培養(yǎng)，同樣的方法建立轉(zhuǎn)移模型，進(jìn)行第二輪和第三輪高轉(zhuǎn)移表型膽囊癌細(xì)胞亞群的篩選。光鏡下觀察轉(zhuǎn)移灶和篩選細(xì)胞的形態(tài)特

2、征；抽提細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝組織DNA，PCR擴(kuò)增三對人類特異的微衛(wèi)星序列。 結(jié)果：建立了裸小鼠肝臟轉(zhuǎn)移模型，轉(zhuǎn)移灶分布肝實(shí)質(zhì)各處，但以邊緣為主。左葉多受侵犯，部分全肝轉(zhuǎn)移。組織學(xué)觀察轉(zhuǎn)移病灶為腺癌。第一輪、第二輪、第三輪轉(zhuǎn)移模型在接種后10周、7周、5周形成肉眼轉(zhuǎn)移灶，轉(zhuǎn)移率為60、70、90％。從第三輪轉(zhuǎn)移灶中篩選高轉(zhuǎn)移膽囊癌細(xì)胞亞群，命名為GBC-SD/M3。與親代細(xì)胞GBC-SD相比，所篩選的GBC-SD/M3在具有相似的形