人肺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的建立及其轉(zhuǎn)移特性分析.pdf

1、目的:對通過體內(nèi)篩選建立的人肺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SPC-A-1sci的轉(zhuǎn)移特性及機理進(jìn)行初步研究，并從中進(jìn)一步分離出不同轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞株，為肺癌轉(zhuǎn)移機理的深入研究提供理想的細(xì)胞模型。 方法:通過體內(nèi)轉(zhuǎn)移試驗結(jié)合小動物成像技術(shù)對SPC-A-1sci細(xì)胞系的體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行驗證，并通過系列體外試驗比較SPC-A-1sci細(xì)胞系與其親代低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SPC-A-1之間增殖、運動、侵襲以及黏附能力的差異。應(yīng)用形態(tài)學(xué)分析比較高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系間的

2、形態(tài)差異，以及通過Western blot、FICC、IHC等方法檢測上皮-間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標(biāo)志物及系列轉(zhuǎn)移相關(guān)基因在高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系間的差異表達(dá)。通過有限稀釋單克隆培養(yǎng)從SPC-A-1sci細(xì)胞系中分離出不同單克隆細(xì)胞株，并通過體內(nèi)、外侵襲轉(zhuǎn)移試驗比較分離出的不同細(xì)胞株之間及與其親代SPC-A-1sci細(xì)胞系之間轉(zhuǎn)移能力的差異。 結(jié)果:體內(nèi)轉(zhuǎn)移試驗證實SPC-A-1sci細(xì)胞系具有顯著增強的自發(fā)性轉(zhuǎn)移潛能，皮下移植后

3、9周肺轉(zhuǎn)移率達(dá)100％。通過小動物成像技術(shù)能夠動態(tài)檢測皮下移植瘤模型中體內(nèi)腫瘤生長及轉(zhuǎn)移情況且進(jìn)一步驗證了該細(xì)胞系在體內(nèi)具有較強的轉(zhuǎn)移特性。與其親代低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SPC-A-1相比，SPC-A-1sci具有顯著增強的體外運動、侵襲及黏附能力，但其增殖能力卻顯著降低。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)SPC-A-1sci具有EMT相關(guān)特性，呈典型紡錘體樣外形，細(xì)胞間隙增大且呈離散生長，偽足明顯等，在獲得性表達(dá)某些間葉細(xì)胞標(biāo)志物（Vimentin）的同時，在其

4、細(xì)胞膜上亦失去或低表達(dá)某些上皮細(xì)胞的標(biāo)志物（E-cadherin）。此外，一些轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（CD44，OPN，MMP-9，EGFR）在此高轉(zhuǎn)移細(xì)胞中亦顯著上調(diào)。從SPC-A-1sci細(xì)胞系中成功分離出三株單克隆細(xì)胞（命名為：SPC-A-1sci-C5，SPC-A-1sci-F3，SPC-A-1sci-C2），三者之間無論是細(xì)胞形態(tài)還是體內(nèi)、外侵襲轉(zhuǎn)移能力均存在一定差異，其中SPC-A-1sci-C5的轉(zhuǎn)移能力明顯高于其他兩株細(xì)胞。