MARVELD1-Tet-on細胞株的建立及其細胞力學性能分析.pdf

1、MARVELD1(MARVEL domaincontainingl)是一個由本課題組發(fā)現(xiàn)的一個腫瘤抑制基因,GenBank編號為AF325259。課題組前期在對其功能研究時發(fā)現(xiàn),MARVELD1影響了細胞粘附、遷移等生物學過程。腫瘤細胞間的同質性粘附降低、與周圍組織的異質性粘附增強,是惡性腫瘤發(fā)生轉移和侵襲的重要條件,而腫瘤細胞的增殖、分化和遷移等過程又與細胞力學性質的變化關系密不可分。這提示了MARVELD1和細胞表面粘附性的變化及細

2、胞本身的力學性能可能有密切關系。
　　建立可控性基因表達體系對研究基因的功能極為重要,因此本課題旨在構建一個能夠調(diào)控MARVELD1開/關性表達的細胞株,并選用目前廣泛認可的Tet基因表達調(diào)控系統(tǒng)為模型。本課題選用不表達MARVELD1的HepG2細胞系進行MARVELD1-Tet-on細胞株的構建,根據(jù)實驗手冊提供的方法,分別轉染pTet-on質粒和pTRE2hygMARVELD1重組體,并進行穩(wěn)定克隆篩選。對篩選后的克隆進行強

3、力霉素誘導,并分別提取蛋白進行MARVELD1的WesternBlot檢測,最終獲得一株誘導效果穩(wěn)定且背景干擾低的MARVELD1-Tet-on細胞株,實現(xiàn)了在HepG2中對外源MARVELD1的開/關調(diào)性控表達。
　　之后,本課題對MARVELD1-Tet-on細胞株進行了細胞形態(tài)及力學性能分析。分別使用光學顯微鏡高倍鏡及掃描電子顯微鏡對誘導MARVELD1表達和未經(jīng)誘導的MARVELD1-Tet-on細胞進行形態(tài)觀測,發(fā)現(xiàn)誘導

4、MARVELD1表達的細胞株,其細胞表面更為鋪展,呈細長型,細胞間連接豐富,而未經(jīng)誘導的細胞呈扁圓型,區(qū)別明顯,可見MARVELD1對細胞形態(tài)和細胞粘附性產(chǎn)生了一定影響。最后,利用原子力顯微鏡對誘導MARVELD1表達和未經(jīng)誘導的細胞進行液下活體掃描,獲得了細胞表面形貌圖及若干組力-距離曲線。由于原子力顯微鏡與生物樣品接觸過程近似滿足赫茲接觸理論,將若干組力-距離曲線進行統(tǒng)計學分析后,帶入赫茲模型得到樣品的楊氏模量。結果顯示,經(jīng)過誘導的