

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、背景:腫瘤轉移是造成死亡的重要原因。但在我們早期臨床和基礎研究展示了轉移灶數目有限(轉移病灶數<5或全身受累器官數<5)、穩(wěn)定或進展緩慢的寡灶型轉移是一個有異于進展迅速的多灶型轉移(轉移病灶數>5或全身受累器官數>5)的臨床診斷和治療的新實體。25%的寡灶型病人在接受寡灶型轉移針對性治療后能達治愈,而從寡灶向多灶型轉移的演變是治療失敗的根本原因。我們最近的臨床觀察顯示了 miR-200c的差異表達能夠分辯呈現穩(wěn)定寡灶型轉移和由寡灶向多灶
2、轉移演進的病人,預示miR-200c有可能是調控寡灶向多灶型轉移演進的重要機制之一。因此本課題欲從分子、細胞和腫瘤的不同層面,來闡明 miR-200C對促進腫瘤寡灶型向多灶型轉移演進的基因調控機制。
目的:建立與臨床相關的寡灶/多灶轉移動物模型并探索miR-200c對寡灶型轉移腫瘤細胞株體外特性的影響。
方法:首先,我們通過尾靜脈注射轉移能力強并帶有GFP表達的人乳腺癌細胞株MDA-MB-435建立與臨床相關的寡灶/
3、多灶轉移裸鼠模型,大約10~12周之后解剖裸鼠,用熒光鏡和470nm藍色激光手電筒能清晰看到體內腫瘤轉移情況,擬獲取穩(wěn)定的寡灶型轉移和多灶型轉移的細胞株。由于 miRNA-200c在寡灶和多灶型轉移細胞中的表達差異明顯,故通過慢病毒感染建立穩(wěn)定高調miRNA-200c表達的寡灶型轉移細胞株(MDA-435-OL-200c),并同時建立陰性對照組(感染空質粒LV3NC)和陽性對照組(多灶型細胞株),通過CCK-8增殖曲線測定、瓊脂平板克隆
4、實驗、transwell小室遷移和侵襲實驗來闡明高調 miRNA-200c對寡灶型轉移細胞體外特性的影響以及高調目的基因后寡灶型與多灶型轉移細胞株體外特性的不同和聯系。
結果:⑴根據寡灶型和多灶型轉移的臨床定義,我們于肺上獲取了疑似寡灶型轉移和多灶型轉移的細胞株。并得到了除了肺以外的其他組織器官的寡灶和多灶的衍生細胞株,同時證實了我們建立的動物模型的穩(wěn)定性以及獲取的寡灶型轉移細胞和多灶型轉移細胞的穩(wěn)定性。⑵慢病毒感染miRNA
5、-200c質粒后,經流式篩選 GFP表達陽性細胞,熒光顯微鏡拍照驗證及熒光定量PCR復檢miRNA-200c的高調,確保了病毒感染的有效性,成功建立穩(wěn)定高表達miRNA-200c的寡灶型細胞株。⑶瓊脂平板克隆實驗結果顯示高調miRNA-200c的寡灶型細胞克隆斑形成率與陽性對照多灶型細胞相當,而高于陰性對照實驗組,差異具有統(tǒng)計學意義。⑷CCK-8細胞增殖曲線測定,發(fā)現三個組別細胞增殖能力相當,增殖曲線重合率高且倍增時間相近。⑸trans
6、well小室遷移實驗結果顯示高調 miRNA-200c后寡灶型細胞遷移能力上升,細胞活力與多灶型細胞相似,稍高于陰性對照組,差異有統(tǒng)計學意義。6、transwell小室侵襲實驗結果如遷移實驗所述,P<0.05。
結論:①建立了與臨床相關的寡灶轉移與多灶轉移的動物模型,并獲取了穩(wěn)定的寡灶轉移細胞株和多灶轉移細胞株。②寡灶型細胞株穩(wěn)定高調 miRNA-200c后體外特性研究描述中有一定程度上呈現出多灶型細胞株的特性,這與我們之前短
7、期高調寡灶細胞miRNA-200c后的研究結果吻合,說明 miRNA-200c有促進已有轉移能力的腫瘤細胞的轉移和侵襲能力。③通過前期研究及本課題研究,miRNA-200c高調后對單個寡灶轉移細胞存活能力及遷移、侵襲能力均有促進作用,說明miRNA-200c可能成為寡灶型轉移腫瘤針對性治療的新靶點。④對這一過程的調控miRNA-200c可能不是唯一的一個基因,并且miRNA-200c對寡灶型轉移到多灶型轉移的調控也可能不只是一個靶基因,
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 寡灶型轉移和多灶型轉移實驗模型的建立和Sec23a基因在寡灶型轉移進程中的作用.pdf
- 95d細胞轉移相關基因在原發(fā)灶,循環(huán)腫瘤細胞和轉移灶中的差異表達
- 舌癌原發(fā)灶對頸部轉移灶血管生成的影響.pdf
- 進展期胃癌原發(fā)灶、轉移灶及外周血淋巴細胞體外藥敏相關性研究.pdf
- 前列腺癌及其骨轉移灶miRNA差異表達的研究.pdf
- 結腸癌肝臟微轉移灶與肉眼轉移灶形成的相關性分析.pdf
- 腫瘤轉移相關因子在喉聲門上型癌、喉咽癌原發(fā)灶及其淋巴結轉移灶中的表達及臨床意義.pdf
- 原發(fā)灶不明轉移癌的臨床診斷
- 胃癌原發(fā)灶與轉移灶E-Cadherin mRNA表達水平的比較研究.pdf
- HLA—A、B、C抗原在肺癌及其轉移灶中的表達及臨床意義.pdf
- 胃癌原發(fā)灶和淋巴結轉移灶HER2表達的臨床意義.pdf
- 轉移灶不可切除結直腸癌切除原發(fā)灶對預后的影響.pdf
- 乳腺癌骨髓微轉移灶的相關研究.pdf
- 小肝癌的臨床病理及預后相關分析多灶與單灶肝細胞癌外周血白細胞基因表達譜的差異研究.pdf
- EGFR在非小細胞肺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中的表達比較.pdf
- 人肺癌高轉移細胞株的建立及其轉移特性分析.pdf
- MMP-2、VEGF、PTEN在乳腺癌原發(fā)灶、轉移灶中的表達及其臨床意義.pdf
- ALDH1在乳腺癌原發(fā)灶及淋巴結轉移灶中的表達及其與浸潤、轉移關系的研究.pdf
- 人膽管癌組織原發(fā)灶和轉移灶裸鼠種植模型的建立及觀察.pdf
- 肌營養(yǎng)不良蛋白聚糖在胃癌原發(fā)灶與轉移灶中的表達及其臨床意義.pdf
評論
0/150
提交評論