miRNA-155調(diào)控NSCLC細(xì)胞株MMPs表達(dá)及影響其侵襲轉(zhuǎn)移能力的研究.pdf

1、目的：研究miR-155對非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞株基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的表達(dá)，以及對NSCLC細(xì)胞株形態(tài)、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　方法：
　　(1)將miR-155 mimic、NC、miR-155 inhibitor、inhibitor NC用Lipofectamine2000分別轉(zhuǎn)染入A549、H1299、H460細(xì)胞株中。
　　(2) Real time PCR技術(shù)檢測miR-155以及M

2、MPs mRNA水平的變化。
　　(3) ELISA技術(shù)檢測MMPs蛋白表達(dá)水平的變化。
　　(4)顯微鏡下觀察 miR-155對細(xì)胞形態(tài)的影響；MTT分析 miR-155對細(xì)胞增殖的影響；Transwell、劃痕實(shí)驗(yàn)分析miR-155對細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　(5) A549細(xì)胞株接種建立裸鼠移植瘤模型。成瘤后，瘤內(nèi)注射miR-155 mimic、inhibitor和對照，每5天轉(zhuǎn)染一次，共轉(zhuǎn)染5次。每3天測量

3、腫瘤組織大小。最后一次轉(zhuǎn)染后3天處死裸鼠，眼眶取血，分離血清；剝離腫瘤組織稱重，勻漿，提取總RNA。
　　結(jié)果：
　　(1) miR-155的mimic和inhibitor可改變NSCLC細(xì)胞株中miR-155表達(dá)水平。
　　(2) miR-155過表達(dá)可促進(jìn)NSCLC細(xì)胞株增殖，提高其侵襲轉(zhuǎn)移能力。
　　(3) miR-155可增強(qiáng)A549細(xì)胞株中MMPs mRNA表達(dá)水平，其中，對MMP-2、MMP-7、MM

4、P-9、MMP-10影響較大。
　　(4) miR-155過表達(dá)可提高A549、H1299、H460細(xì)胞株中MMP-2、MMP-7、MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　(5)裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)中miR-155 mimic處理組瘤體較其陰性對照組大，證實(shí)miR-155對裸鼠移植瘤的生長有促進(jìn)作用，可影響瘤體組織中MMP-2、MMP-7、MMP-9的表達(dá)水平，miR-155可提高M(jìn)MP-2、MMP-7、MMP-9 mRNA表達(dá)