姜黃素對絨毛膜癌細(xì)胞株JAR侵襲和轉(zhuǎn)移的影響及分子機制的研究.pdf

1、【目的】 研究姜黃素(Curcumin,Cur)對人類絨毛膜癌細(xì)胞株JAR細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，探討其作用機制。從Curcumin抑制侵襲轉(zhuǎn)移能力及相關(guān)基因調(diào)控的作用中發(fā)現(xiàn)控制和治療絨癌的新的有效方法。 【方法】 1、用不同濃度(10、20、40umol/L)Curcumin處理體外培養(yǎng)的絨毛膜癌細(xì)胞株JAR，在處理后24小時，以MTT比色法檢測Curcumin對JAR細(xì)胞生長增殖的影響； 2、流式細(xì)胞儀

2、檢測Curcumin對JAR細(xì)胞周期的影響； 3、倒置光學(xué)顯微鏡觀察不同濃度(10、20、40umol/L，)Curcumin 處理體外培養(yǎng)的絨毛膜癌細(xì)胞株JAR后，細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的變化： 4、以細(xì)胞粘附人工重組基底膜實驗檢測Curcumin對JAR細(xì)胞粘附能力的影響； 5、用Transwell小室法檢測Curcumin對JAR 細(xì)胞的侵襲能力的影響； 6、應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)(RT-PCR)檢測Curcu

3、min對JAR細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因 C-met mRNA 及 Ets-1 mRNA 的表達的影響。 【結(jié)果】 1．Curcumin對JAR細(xì)胞生長增殖的影響 MTT 抑制實驗得出Curcumin對JAR細(xì)胞的增殖具有一定程度的抑制作用，且抑制作用呈時間、劑量依賴性。用 control，0.1％DMSO，Cur10、20、40umol/L分別處理JAR細(xì)胞6h、24h、48h，觀察到在6h內(nèi)，抑制率小于10％，且與

4、對照組相比，差異無顯著性。為了排除藥物對細(xì)胞的損傷作用從而考察Cur對JAR細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力的抑制作用，選擇 Cur10、20、40umol/L 作為實驗終濃度。通過倒置光學(xué)顯微鏡拍照觀察，可見到JAR細(xì)胞的形態(tài)變化：隨著Curcumin濃度的增加，JAR 細(xì)胞逐漸縮小、變圓、分散，細(xì)胞核減少；而且抑制率隨著濃度和時間的增加而增加。 2．人工重組基底膜侵襲實驗 用Transwell小室法檢測Curcumin對JAR細(xì)

5、胞的侵襲能力。結(jié)果顯示藥物對JAR．細(xì)胞的侵襲能力有明顯影響：濃度越大，細(xì)胞的侵襲能力就越弱。Cur20umol /L、40umol/L 對應(yīng)的抑制率是20.66±2.3、38.66±5.0％，與對應(yīng)組比較，差異具有非常統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 3．細(xì)胞粘附實驗 以細(xì)胞粘附人工重組基底膜實驗檢測Curcumin 對 JAR 細(xì)胞粘附能力的影響。結(jié)果顯示藥物在10 umol/L～40 umol/L內(nèi)，對JAR細(xì)胞的粘附

6、能力有明顯影響，濃度越大，細(xì)胞的粘附能力就越弱。Cur10、20、40umol/L 抑制率分別達到：7.37±7.17％，18.78±4.60％，53.72±4.61％。后兩者與對照組比較，差異具有非常統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 4．流式細(xì)胞術(shù) 檢測流式細(xì)胞儀檢測Curcumin對JAR細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。當(dāng) Curcumin10、20、40umol/L處理JAR細(xì)胞24h，處理細(xì)胞，上機檢測。發(fā)現(xiàn)藥物對細(xì)胞周期有影響

7、，發(fā)現(xiàn) Curcumin可以使G<,0>/G<,1>期細(xì)胞減少，G<,2>/M期和S期細(xì)胞增加。 5．反轉(zhuǎn)錄PCR RT-PCR檢測C-met mRNA、Ets-1mRNA 的表達情況。采用Bandscan進行光密度檢測：結(jié)果顯示藥物在10 umol/L～40 umol/L范圍內(nèi)可以呈劑量依賴性下調(diào) C-met、Ets-1基因mRNA的表達。 【結(jié)論】 Ccurcumin對JAR 細(xì)胞的增殖具有一定程度的