1α，25-二羥基維生素D-,3-對(duì)絨毛膜癌細(xì)胞株JAR增殖和分化的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、本文研究了生物制劑1α,25-二羥基維生素D3(calcitriol)對(duì)JAR細(xì)胞的增殖和分化的影響，探討其作用機(jī)制，為絨毛膜癌誘導(dǎo)分化治療提供一條新思路。 [方法]用不同濃度(10-8、107、10-6mol/L)calcitriol處理體外培養(yǎng)的絨毛膜癌細(xì)胞株JAR，分別在處理后不同的時(shí)間點(diǎn)(1d、3d、6d)，以MTT比色法檢測(cè)calcitriol對(duì)JAR細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞儀檢測(cè)calcitriol對(duì)JAR細(xì)胞周期的

2、影響；光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)上觀察；RT-PCR檢測(cè)維生素D受體(VDR)mRNA水平的表達(dá)；WesternBlot檢測(cè)VDR蛋白表達(dá)。 [結(jié)果] 1.1α，25-二羥基維生素D3抑制JAR細(xì)胞增殖MTT比色法檢測(cè)calcitriol對(duì)JAR細(xì)胞增殖的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著calcitriol濃度的增加，相對(duì)于對(duì)照組而言，A值減少；隨著時(shí)間的增加，同一濃度與對(duì)照組比較，A值減少，呈明顯的時(shí)間—?jiǎng)┝啃?yīng)關(guān)系。JAR細(xì)胞1

3、0-6mol/Lcalcitriol作用3d與對(duì)照組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，JAR細(xì)胞10-7、10-6mol/Lcalcitriol作用6d分別與對(duì)照組之間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。計(jì)算出抑制率(IR)及半數(shù)抑制濃度(IC50)。 2.1α，25-二羥基維生素D3誘導(dǎo)JAR細(xì)胞分化流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，JAR細(xì)胞應(yīng)用10-6mol/Lcalcitriol作用6天后(IC50組)，G1期細(xì)胞

4、數(shù)百分比從47.78％增加到59.81％(P＜0.01)，S期細(xì)胞數(shù)百分比從54.6％減少到33.08％(P＜0.01)，表明calcitriol是通過(guò)G()G()期捕獲抑制JAR細(xì)胞增殖。JAR細(xì)胞10-6mol/Lcalcitriol作用6天后，HE染色后光學(xué)顯微鏡下觀察，與對(duì)照組比較，JAR細(xì)胞體積縮小，核/漿比下降，核型有不規(guī)則凹陷、扭曲，核分裂像減少。以上結(jié)果表明，calcitriol可誘導(dǎo)JAR細(xì)胞分化。 3.1α，

5、25-二羥基維生素D3上調(diào)VDRmRNA表達(dá)應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)VDRmRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示，IC50組與對(duì)照組VDRmRNA相對(duì)表達(dá)豐度分別為3.79±0.21、2.24±0.16，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，calcitriol上調(diào)VDRmRNA表達(dá)。 4.1α，25-二羥基維生素D3上調(diào)VDR蛋白表達(dá)應(yīng)用WesternBlot檢測(cè)VDR蛋白表達(dá)，經(jīng)BandScan4.3圖像分析軟件分析VDR/β-actin灰度比值