1α，25（OH）-,2-維生素D-,3-及全反式維甲酸對腫瘤細(xì)胞生長及細(xì)胞周期影響的研究.pdf

1、目的：通過單獨及聯(lián)合使用1 α，25二羥維生素D<,3>(1 alpha，25-dihydFOXy vitamin D<,3>，1，25D<,3>)和全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)對腫瘤細(xì)胞(肝癌HepG2細(xì)胞和結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞)進行誘導(dǎo)，研究其對腫瘤細(xì)胞生長和細(xì)胞周期的影響及其作用的分子機制。 方法：用不同濃度的1，25D<,3>、ATRA對HepG2細(xì)胞和LoVo細(xì)胞分別進行單

2、獨和聯(lián)合用藥誘導(dǎo)，MTT比色法檢測細(xì)胞的抑制率，相差顯微鏡和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞核的改變情況，流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測細(xì)胞周期改變及凋亡率，逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(reverse transcn ption polymerase chain reaction，RT-PcR)和FCM檢測細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶抑制因子p21<'WAFI/CIPI>和p27<'KIPI>的mRNA和蛋白表達的改變。

3、 結(jié)果：1，25D3和ATRA均能抑制HepG2細(xì)胞和LoVo細(xì)胞的增殖，并呈時間和劑量依賴效應(yīng)，聯(lián)合用藥組的抑制率明顯高于單獨用藥組(P<0.05)；FCM證實經(jīng)1，25D<,3>和ATRA誘導(dǎo)細(xì)胞均出現(xiàn)明顯的細(xì)胞周期時相的改變，即G<,1>期阻滯，同時S期和G<,2>期細(xì)胞比例下降，其中聯(lián)合用藥組較單獨用藥更為顯著(P<0.05)；用Annexin V/PI雙染法及熒光顯微鏡均證實有細(xì)胞凋亡產(chǎn)生：RT-PCR和FCM顯示經(jīng)誘

4、導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞p21<'WAFI/CIPI>的mRNA和蛋白水平增高，而p27<'KIPI>的蛋白水平增高，mRNA未見明顯改變，其中聯(lián)合用藥組更為顯著(P<0.05)。 結(jié)論：1，25D<,3>和ATRA能夠通過上調(diào)細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶抑制因子p21<'WAFI/CIPI>和p27<'klPl>的蛋白表達，改變腫瘤細(xì)胞周期時相分布，導(dǎo)致G<,1>期阻滯，同時誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖；當(dāng)二者聯(lián)合用藥時，能夠產(chǎn)生協(xié)