維生素C、D-,3-和9順式維甲酸對(duì)豬脂肪細(xì)胞增殖與分化的影響.pdf

1、本文利用分離培養(yǎng)的原代豬前體脂肪細(xì)胞，利用細(xì)胞培養(yǎng)、油紅O染色及提取法，半定量RT-PCR等細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，在體外較為系統(tǒng)地研究了維生素C、D3和9順式維甲酸對(duì)豬脂肪細(xì)胞增殖和分化及分化過(guò)程中成熟脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子和脂肪形成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄時(shí)序表達(dá)的影響，探討了維生素C、D<,3>和9cisRA維生素類物質(zhì)對(duì)豬脂肪細(xì)胞發(fā)育的調(diào)控機(jī)制。主要研究結(jié)果如下： 1、利用SQRT-PCR法檢測(cè)，RXRIα腎臟組織中表達(dá)量最高，其次是

2、肌肉和肝臟組織，再次是皮下脂肪組織、脾臟和肺，在心臟組織中表達(dá)量最低； 2、維生素C以劑量和時(shí)間依賴的方式促進(jìn)豬脂肪細(xì)胞的增殖分化。SQRT-PCR結(jié)果顯示，250 μmol/L Vit C通過(guò)上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子：PPARγ和RXRα mRNA的表達(dá)，促進(jìn)脂肪形成相關(guān)基因LPL、SCD和PEPCK mRNA的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞的分化； 3、維生素D<,3>在1×10<'-4>～1μmol/L，的濃度范圍內(nèi)以劑量和時(shí)間依

3、賴的方式抑制豬脂肪細(xì)胞的增殖和分化。SQRT-PCR結(jié)果顯示，1μmol/L，的VD3在分化第1和5天，顯著抑制PPARγ和RXRαmRNA的表達(dá)(P<0.05)，同時(shí)下調(diào)LPL、PEPCK、SCD、GPDH和Glut4 mRNA的表達(dá)。但在分化至第3和7天，因未添加維生素D<,3>，這些基因的表達(dá)量雖上升，但不能恢復(fù)至正常水平； 4、10μmol/L的9順式維甲酸以時(shí)間依賴的方式抑制豬脂肪細(xì)胞的分化。聯(lián)合1gmol/LVD<,

4、3>則使抑制作用加強(qiáng)。SQRT-PCR結(jié)果顯示，10 gmol/L9順式維甲酸顯著下調(diào)PPARγ和RXRα mRNA的表達(dá)，同時(shí)也下調(diào)LPL、PEPCK、SCD、GPDH和Glut4 mRN,A的表達(dá)。當(dāng)在第5天不添加9順式維甲酸，培養(yǎng)至第7天，檢測(cè)到成熟脂肪細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)量上調(diào)，脂肪形成相關(guān)基因的表達(dá)也上升，但不會(huì)恢復(fù)至正常水平。但培養(yǎng)基中同時(shí)存在維生素D<,3>時(shí)，分別培養(yǎng)至第1和5天，9順式維甲酸的抑制效應(yīng)得到增強(qiáng)，即明顯降