1,25二羥基維生素D3對人乳腺癌細胞Orai1及Orai3表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：運用適當濃度1,25-二羥基維生素D3（1,25-dihydroxy vitamin D3，1,25-(OH)2D3）、他莫昔芬（Tamoxifen，TAM）分別處理雌激素受體（Estrogen receptor，ER）、維生素D受體（Vitamin D receptor，VDR）不同表達狀態(tài)的乳腺癌細胞系MCF-7（ER+，VDR+）、MDA-MB-231（ER-，VDR-）、MDA-MB-453（ER-，VDR+），檢測三種細

2、胞膜鈣離子通道成分Orai1，Orai3表達變化，分析維生素D對乳腺癌細胞Orai1及Orai3表達的影響，探討由維生素D誘導的對Orai介導的Ca2+信號通路與ER受體通路的關聯(lián)性，活性維生素D對ER受體及VDR受體不同表達狀態(tài)下的乳腺癌細胞促進凋亡的作用及可能的機制。
　　方法：傳代培養(yǎng)ER、VDR不同表達狀態(tài)的乳腺癌細胞系MCF-7（ER+，VDR+）, MDA-MB-231（ER-，VDR-），MDA-MB-453（ER-

3、，VDR+），以1,25-(OH)2D3（1×10-8mol/L）處理對數(shù)生長期的乳腺癌細胞，同時用17-β-雌二醇（1×10-9mol/L）和他莫昔芬（1×10-6mol/L）分別處理這三種細胞作為對照，于處理后48h時間點收集細胞，提取RNA及蛋白，采用Real-time RT-PCR法檢測Orai1和Orai3的mRNA相對含量，Western Blot檢測其蛋白的表達情況。
　　結果：
　　1.ER陽性表達的MCF-

4、7乳腺癌細胞中Orai3的表達水平高于ER陰性表達的MDA-MB-231，MDA-MB-453細胞（P<0.05）；在ER陽性表達的MCF-7乳腺癌細胞中，17-β-雌二醇可以上調(diào)Orai3的表達，其ER受體拮抗劑TAM則抑制Orai3的表達（P<0.05）。
　　2.維生素D作用于三種ER、VDR不同狀態(tài)下的乳腺癌細胞后，Orai3的表達僅在ER及VDR陽性表達的MCF-7細胞中明顯受到抑制（P<0.05），ER及VDR表達陰性

5、的MDA-MB-231，ER陰性及VDR陽性MDA-MB-453細胞中未見明顯受抑（P＞0.05）。
　　3.維生素D在VDR陰性表達的MDA-MB-231細胞中對Orai1而非Orai3表達有上調(diào)作用（P<0.05）；在VDR陽性表達的MCF-7（ER+，VDR+）,MDA-MB-453（ER-，VDR+）細胞中未見對Orai1表達的促進或抑制（P＞0.05）。
　　結論：
　　1.Orai3在ER陽性表達的MCF-