1,25-二羥維生素D3對血管加壓素介導(dǎo)的大鼠心臟成纖維細胞增殖及TGFβ-1表達的影響.pdf

1、目的：通過觀察1,25-二羥維生素D3（1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25D）對血管加壓素（Argipressine，AVP）誘導(dǎo)的大鼠心臟成纖維細胞(cardiac fibmblasts，CFs)增殖的影響及其與轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factorβ1,TGFβ-1）的關(guān)系，探討1,25-二羥維生素D3對心肌成纖維細胞增殖的影響及其可能機制。
　　方法：
　　1．

2、大鼠成纖維細胞培養(yǎng)和處理：復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)；
　　2．細胞干預(yù)培養(yǎng)：將大鼠心臟成纖維細胞分為12孔進行培養(yǎng)，每孔含細胞數(shù)5×103個，共分成四組：AVP組、VD3組、AVP+ VD3組、空白對照組，其中AVP組共1孔，予以10－7mmol/L AVP處理；VD3組共A、B、C、D、E5孔，分別予以10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/L濃度的VD3處理；AVP+VD3組共A、B、C、D、E5孔，均予以10-7mm

3、ol/L AVP處理，并分別予以10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/L濃度的VD3處理；空白對照組共1孔，無干預(yù)。培養(yǎng)和干預(yù)24小時后，留取上清液，收集細胞。
　　3．采用二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽法(MTT法)檢測各組細胞的的吸光度值；
　　4．采用流式細胞分析儀技術(shù)（flow cytometry,FCM）檢測各組細胞的DNA合成期（S期）細胞百分比；
　　5．采用反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse t

4、ranscription-PCR, RT-PCR)法檢測各組細胞的中TGF-β1 mRNA表達水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1的濃度。
　　結(jié)果：
　　1．AVP組細胞的吸光度值(1.380±0.008）較空白對照組(1.100±0.015)明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;
　　2．AVP+ VD3

5、組各孔細胞的吸光度值分別為A（1.345±0.005）、B（1.247±0.014）、C(1.198±0.011)、D(1.159±0.010)、E（1.115±0.013），且呈濃度依賴性降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，其中E孔吸光度值最低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；AVP+ VD3組各孔吸光度值較對照組(1.100±0.015)均明顯升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，但較 AVP組(0.776±0.

6、013）均明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05);
　　3．VD3組各孔細胞的吸光度值分別為A（0.956±0.005）、B（1.006±0.012）、C（1.052±0.004）、D（1.058±0.011）、E（1.037±0.013）,均較對照組明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；
　　4．AVP組細胞的S期細胞百分比（35.2％）、AVP+VD3組（E孔）的S期細胞百分比（29.69%）均較空白對

7、照組（22.57%）明顯增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）；AVP+ VD3組（E孔）S期細胞百分比較AVP組（29.69%VS35.2%）明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；且VD3組（E孔）S期細胞百分比明顯低于空白對照組（19.25% VS22.57%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;
　　5．AVP組細胞TGF-β1 mRNA表達水平較空白對照組（2.893±0.205VS1.000±0.014）明顯增

8、高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；VD3+AVP組（E孔）細胞TGF-β1 mRNA水平較AVP組（1.895±0.122VS2.893±0.205）明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；VD3組細胞TGF-β1 mRNA表達水平顯著低于其他各組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
　　6．AVP組（78.310±4.803）pg/mg、AVP+VD3組（62.479±5.846）pg/mg細胞培養(yǎng)上清液中的TGF-β1

9、濃度均較空白對照組（44.29577±7.863）pg/mg明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；AVP+VD3組（E孔）細胞培養(yǎng)上清液中的TGF-β1濃度較AVP組（62.479±5.846 VS78.310±4.803）pg/mg明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而且VD3組（20.578±3.619）pg/mg（E孔）TGF-β1表達量顯著低于其他各組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：