1,25-二羥維生素D3對(duì)腎間質(zhì)纖維化大鼠Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：
　　本研究主要通過(guò)觀(guān)察1,25(OH)2D3對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cells, Tregs）的影響，探討1,25(OH)2D3對(duì)大鼠腎間質(zhì)纖維化的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　(1)選用體重（200±10）g的健康雄性Wistar大鼠，總數(shù)為54只。將其隨機(jī)分為假手術(shù)組（A組）、單側(cè)輸尿管梗阻組（UUO組，即B組）、1,25(OH)2D3治療組（C組），每組各18只。B組及C組采用將單側(cè)輸

2、尿管進(jìn)行結(jié)扎，A組采用將輸尿管游離，但是不結(jié)扎。C組給予1,25(OH)2D33ng/100g，A組及B組給予花生油0.5ml，均于每日上午灌胃，實(shí)驗(yàn)期間各組正常飲食生活。A組、B組、C組分別于術(shù)后1天、3天、7天隨機(jī)處死6只大鼠，留取血標(biāo)本及手術(shù)側(cè)的腎組織。
　　(2)檢測(cè)大鼠血肌酐、血鈣、血磷水平的變化情況，采用HE及Masson染色觀(guān)察腎臟組織病理變化，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR，RT-PCR)

3、檢測(cè)大鼠腎臟組織人叉頭框蛋白P3（human forkhead box P3，F(xiàn)oxp3）mRNA的水平，采用免疫組化檢測(cè)各大鼠腎臟α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle acyin,α-SMA)及FOXP3蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：
　　(1) B組（UUO組）較同時(shí)間點(diǎn)A組（假手術(shù)組）相比，肌酐水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；C組（1,25(OH)2D3治療組）較同時(shí)間點(diǎn)B組相比，

4、肌酐水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。A組、B組和C組大鼠同時(shí)間點(diǎn)血鈣、血磷水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　(2)腎臟組織HE、Masson染色：HE結(jié)果示，光鏡觀(guān)察,發(fā)現(xiàn)A組（假手術(shù)組）各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)腎小管、腎小球未見(jiàn)明顯變化，未見(jiàn)單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)明顯纖維化。B組（UUO組）第1天和第3天觀(guān)察腎臟組織，可見(jiàn)腎小管輕度擴(kuò)張，上皮細(xì)胞偶爾出現(xiàn)變性、水腫，極少數(shù)上皮細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)壞死，腎間質(zhì)寬度增加，可

5、見(jiàn)少量的單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；第7天時(shí)觀(guān)察腎臟組織，可見(jiàn)腎小管擴(kuò)張更加明顯，上皮細(xì)胞空泡變性，腎間質(zhì)可見(jiàn)大量單核細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)寬度明顯增加，間質(zhì)結(jié)構(gòu)廣泛破壞。C組較B組同時(shí)間點(diǎn)相比，病理改變及纖維化程度減輕。Masson染色半定量分析結(jié)果示B組較同時(shí)間點(diǎn)A組比較，相對(duì)面積顯著增加，纖維化程度重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。C組較同時(shí)間點(diǎn)A組比較，相對(duì)面積減少，纖維化程度減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(3)大

6、鼠腎臟FOXP3 mRNA相對(duì)表達(dá)量： B組與A組同時(shí)間點(diǎn)比較，腎組織FOXP3 mRNA水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與B組同時(shí)間點(diǎn)比較，C組腎組織FOXP3 mRNA水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(4)各組大鼠腎組織α-SMA、FOXP3蛋白表達(dá)情況：B組與A組同時(shí)間點(diǎn)相比，腎組織α-SMA表達(dá)顯著升高，F(xiàn)OXP3表達(dá)顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)，B