干擾β-catenin信號(hào)通路對(duì)人胃癌細(xì)胞株miRNA表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的:
　　本研究擬通過構(gòu)建慢病毒載體介導(dǎo)干擾人胃癌AGS、MGC-803細(xì)胞系中β-catenin信號(hào)通路的活性,利用miRNA芯片技術(shù)尋找干擾后差異表達(dá)的miRNA表達(dá)譜,為進(jìn)一步了解β-catenin信號(hào)通路及相關(guān)miRNA調(diào)控胃癌的機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　方法:
　　構(gòu)建干擾β-catenin基因( ctnnb1)的慢病毒,分別感染人胃癌AGS和MGC-803細(xì)胞系。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot檢測(cè)

2、干擾效率。
　　將AGS細(xì)胞分兩組:1)實(shí)驗(yàn)組:AGS干擾組,2)對(duì)照組:AGS細(xì)胞組;將MGC-803細(xì)胞分為兩組:1)實(shí)驗(yàn)組:MGC-803干擾組,2)對(duì)照組:MGC-803細(xì)胞組。利用miRNA芯片篩選兩種細(xì)胞干擾β-catenin后差異表達(dá)的miRNA,并通過qPCR技術(shù)驗(yàn)證部分芯片結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1、成功構(gòu)建干擾β-catenin基因的慢病毒 LV3-CTNNB1-homo-433與LV3-CTNNB

3、1-homo-769。LV3-CTNNB1-homo-433對(duì)AGS細(xì)胞及MGC-803細(xì)胞均具有干擾作用, LV3-CTNNB1-homo-769對(duì) AGS細(xì)胞無干擾作用,對(duì)MGC-803細(xì)胞有干擾作用。
　　2、感染LV3-CTNNB1-homo-433后,AGS細(xì)胞、MGC-803細(xì)胞中miRNA表達(dá)譜產(chǎn)生明顯變化。其中,AGS干擾組較AGS細(xì)胞組有40個(gè)miRNA上調(diào),32個(gè)miRNA下調(diào);MGC-803干擾組較MGC-8