蟾毒靈對(duì)人肝癌細(xì)胞株增殖遷移侵襲黏附能力的影響及其機(jī)理研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文蟾毒靈對(duì)人肝癌細(xì)胞株增殖迀移侵襲黏附能力的影響及其機(jī)理研究Theeffectmechanismofbufalinontheproliferationmigrationinvasionadhesionofhumanhepatomacelllines院系:中山醫(yī)院專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床(腫瘤方向)姓名：仇冬則導(dǎo)師:楊云柯副教授組成員：李立新副主任醫(yī)師王國(guó)驊主治醫(yī)師蟾毒靈對(duì)人肝癌細(xì)胞株增殖遷移侵襲黏附能力的影響及其機(jī)理研究摘

2、要研究背景原發(fā)性肝癌是我國(guó)常見惡性腫瘤，死亡率高，在惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的原因中居第三位。相當(dāng)多的肝癌發(fā)現(xiàn)時(shí)已是晚期，即使是接受根治手術(shù)的病人術(shù)后5年仍有30%至40%的復(fù)發(fā)率。晚期肝癌病人的中位生存時(shí)間為6到8個(gè)月，對(duì)于晚期肝癌的病人還沒有有效的治療方法。因而尋找肝癌治療的新靶點(diǎn)具有重要的臨床意義。研究發(fā)現(xiàn)我國(guó)臨床上常用的抗腫瘤中成藥蟾酥制劑的有效成分強(qiáng)心苷類物質(zhì)蟾毒靈（bufalin)具有抑制腫瘤細(xì)胞株增殖、誘導(dǎo)凋亡、逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞株耐藥

3、的作用，并發(fā)現(xiàn)bufalin可以抑制腫瘤細(xì)胞株Akt的磷酸化。Akt磷酸化后引起調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)的改變?cè)谀[瘤的生長(zhǎng)、增殖、凋亡、運(yùn)動(dòng)、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、血管生成和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。而bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株侵襲遷移的作用尚未見報(bào)道，預(yù)實(shí)驗(yàn)研究表明bufalin可以抑制HCCLM3細(xì)胞株體外遷移，但其作用機(jī)理還不明了，其抑制腫瘤細(xì)胞遷移是否與抑制Akt磷酸化繼而影響下游調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)還有待研究，本實(shí)驗(yàn)將從體外實(shí)驗(yàn)探討bufalin對(duì)人肝癌細(xì)

4、胞株增殖、遷移、侵襲、黏附的影響及其與Akt信號(hào)通路關(guān)系，以期為蟾酥制劑的抗腫瘤作用尤其是抑制腫瘤侵襲方面提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究目的本研究從體外實(shí)驗(yàn)觀察bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株HCCLM3、HepG2增殖、遷移、侵襲、黏附生物學(xué)行為的影響，并以Akt為靶點(diǎn)，研究bufalin對(duì)Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白Akt、pAkt(Ser473)、pGSK33(Ser9)、GSK3P、Pcatenin(Ser3337)、0catenin、Ecadher

5、in的表達(dá)及Pcatenin核易位的影響，探討bufalin對(duì)Akt—GSK3P一Pcatenin一Ecadherin信號(hào)通路的影響及其抑制腫瘤增殖、遷移、侵襲、黏附作用的機(jī)理。研究方法體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株HCCLM3、HepG2增殖、遷移、侵襲、黏附作用的影響。通過CCK8法評(píng)價(jià)bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株的增殖抑制作用；劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwellmigration模型評(píng)價(jià)bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株遷移能力影響

6、；Transwellinvasion模型評(píng)價(jià)bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株侵襲能力的影響；黏附實(shí)驗(yàn)觀察bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株點(diǎn)附能力的影響。Westernbolt檢測(cè)Akt、pAkt(Ser473)、pGSK3P(Ser9)、GSK33、0catenin(Ser3337)、Pcatenin、Ecadherin的表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)0catenin核易位情況及Ecaherein的表達(dá)。結(jié)果1、Bufalin對(duì)人肝癌細(xì)胞株HCCLM3