小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型的建立及其活化肝星狀細(xì)胞表達(dá)的研究.pdf

1、目的：肝轉(zhuǎn)移是結(jié)腸癌患者死亡的最主要原因，其轉(zhuǎn)移機(jī)制仍未完全明了。建立結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停欣诮Y(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的生物學(xué)研究及抗腫瘤藥物的篩選和有效防治方案的探索。本課題嘗試應(yīng)用囊袋法瘤塊盲腸原位移植建立小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，并初步研究活化的肝星狀細(xì)胞在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中的分布及表達(dá)特點(diǎn)。
　　方法：(1)囊袋法建立盲腸原位移植結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型：將小鼠結(jié)腸腺癌細(xì)胞(CT26)注射進(jìn)小鼠項(xiàng)背部皮下，生長出瘤塊后，切成2mm大小的小塊，

2、囊袋法將瘤塊原位移植到小鼠盲腸腸壁上。術(shù)后觀察大體情況、自然生存時(shí)間和肝轉(zhuǎn)移率等。
　　(2)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型中活化肝星狀細(xì)胞的表達(dá)水平觀察：10％中性福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)組織切片。組織切片經(jīng)常規(guī)脫蠟和水化后，過氧化氫去除內(nèi)源性過氧化物酶，修復(fù)抗原，加一抗抗小鼠α-SMA單克隆抗體，加生物素標(biāo)記的二抗和SABC復(fù)合物，新鮮配制DAB液顯色。
　　結(jié)果：(1)小鼠皮下接種后3周長出直徑約2cm的腫塊。術(shù)后3周剖腹檢查(

3、n=5)見左下腹均有腫塊，肝臟表面未見結(jié)節(jié)；術(shù)后4周時(shí)，剖腹檢查(n=5)見左下腹腫塊較三周時(shí)增大，其中2只小鼠可見鄰近腫瘤的小腸壁有轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，3只小鼠肝臟表面見癌結(jié)節(jié)。術(shù)后3結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移率40％，術(shù)后4周轉(zhuǎn)移率60％。
　　(2)癌組織(n=5)和癌旁組織(n=5)內(nèi)均可見α-SMA陽性細(xì)胞。未轉(zhuǎn)移組肝組織(n=5)中1例見α-SMA陽性細(xì)胞。轉(zhuǎn)移灶(A組)中HSC的活化數(shù)量和強(qiáng)度較癌旁組織(B組)有顯著差異，而癌旁組織又明顯高于

4、未轉(zhuǎn)移肝組織(C組)。A、B、C三組陽性面積分別為26594.99±10170.42μm2，6157.03±2164.24μm2，1404.22±2901.31μm2，數(shù)密度分別為0.01274±0.007475/μm2，0.00310±0.001575/μm2，0.00064±0.001327/μm2，三組間陽性面積和數(shù)密度比較P<0.05。
　　結(jié)論：囊袋法盲腸原位移植瘤塊法是制作結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的理想方法。HSC的活化數(shù)量和強(qiáng)度