PCDH15跨膜運(yùn)輸機(jī)制的初步探討.pdf

1、在聽(tīng)覺(jué)傳導(dǎo)過(guò)程中，聲波通過(guò)機(jī)電轉(zhuǎn)導(dǎo)(MET)的過(guò)程轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，這個(gè)過(guò)程發(fā)生在耳蝸毛細(xì)胞的聽(tīng)纖毛。受到機(jī)械信號(hào)刺激后，MET裝置的核心元件-頂連接(Tip-Link)張力增加，MET通道開(kāi)放，這導(dǎo)致細(xì)胞受體電位的產(chǎn)生。Tip-Link破壞的話，聽(tīng)覺(jué)轉(zhuǎn)導(dǎo)就不能發(fā)生，會(huì)導(dǎo)致耳聾。作為毛細(xì)胞Tip-Link的組成成分之一的原鈣粘蛋白15即PCDH15，在聽(tīng)覺(jué)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著十分重要的作用。PCDH15有三種不同的剪接木，在聽(tīng)纖毛發(fā)育期間的機(jī)械-電轉(zhuǎn)

2、導(dǎo)過(guò)程中冗余地發(fā)揮作用。PCDH15基因的突變能夠引起聽(tīng)力損失。但是到目前為止，有關(guān)PCDH15細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)恼{(diào)控機(jī)制的研究仍然沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道。
　　在本論文中，我們對(duì)PCDH15細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)恼{(diào)控機(jī)制進(jìn)行了初步探討。首先我們用酵母雙雜交來(lái)篩選與PCDH15相互結(jié)合的蛋白，我們發(fā)現(xiàn)PIST（一個(gè)與高爾基體相聯(lián)系，具有PDZ結(jié)構(gòu)域的蛋白）能夠與PCDH15-CD3相互作用。在酵母雙雜交的基礎(chǔ)上，本論文用共免疫沉淀和亞細(xì)胞共定位的實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)

3、證了PCDH15-CD3與PIST的相互結(jié)合。我們發(fā)現(xiàn)這種相互作用是通過(guò)PCDH15-CD3C末端的PDZ結(jié)構(gòu)域結(jié)合界面(PBI)以及PIST的PDZ結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)的。通過(guò)二者的相互作用，PIST把PCDH15-CD3滯留在反面高爾基網(wǎng)(TGN)，從而減少了PCDH15-CD3在細(xì)胞膜上的表達(dá)。我們之前的工作發(fā)現(xiàn)PIST能夠調(diào)控Tip-Link的另外一個(gè)核心元件-鈣粘蛋白23(CDH23)的細(xì)胞膜表達(dá)。綜合起來(lái)，我們的發(fā)現(xiàn)表明PIST能夠調(diào)

4、控與Tip-Link相關(guān)的鈣粘蛋白PCDH15-CD3和CDH23的絀胞內(nèi)運(yùn)輸和細(xì)胞膜靶向定位。
　　有研究表明PCDH15可以與含有PDZ結(jié)構(gòu)域的Usher蛋白Harmonin、PDZD7、Whirlin結(jié)合，但不同PCDH15亞型與這些蛋白之間的作用模式未見(jiàn)報(bào)道。我們通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Whirlin及PDZD7與PCDH15-CD3相互作用，但不與PCDH15-CD1或PCDH15-CD2結(jié)合。此外，免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)沒(méi)有檢測(cè)