嗅鞘細(xì)胞條件培養(yǎng)基改善Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷.pdf

1、目的：
　　本研究旨在探討嗅鞘細(xì)胞條件培養(yǎng)基（Olfactory ensheathing cells conditioned medium，OECCM）在阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）細(xì)胞模型中的作用以及OECCM能否通過(guò)影響線粒體凋亡途徑改善Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷，為AD的治療提供更廣闊的視角。
　　方法：
　　選用Aβ25-35誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞建立AD體外

2、細(xì)胞模型，同時(shí)加入OECCM處理SH-SY5Y細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為3組（對(duì)照組、Aβ組、OECCM組）進(jìn)行以下檢測(cè)：CCK8測(cè)細(xì)胞存活率、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞內(nèi)活性氧和鈣離子成像；生化檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞上清液中丙二醛（MDA）的含量和內(nèi)源性抗氧化酶的活性；熒光定量PCR和蛋白免疫印跡法（WB）測(cè)定內(nèi)源性抗氧化酶和線粒體凋亡相關(guān)基因mRNA和蛋白的表達(dá)，免疫熒光測(cè)定細(xì)胞Bax和Bcl-2的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）Aβ組

3、細(xì)胞存活率明顯低于對(duì)照組（P＜0.001），而OECCM組細(xì)胞活存活率高于Aβ組（P＜0.001）。
　?。?）Aβ組細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生高于對(duì)照組（p=0.026），OECCM組細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生低于Aβ組（p=0.046）。Aβ組細(xì)胞上清液中MDA濃度高于對(duì)照組（p=0.018），OECCM組 MDA濃度明顯低于 Aβ組（p=0.02）。
　?。?）細(xì)胞上清液中抗氧化酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示：Aβ組細(xì)胞上清液中抗氧化酶活性顯著低于對(duì)

4、照組（T-SOD，p=0.006；CAT，p=0.03；GPx，P＜0.001），OECCM組抗氧化酶活性高于Aβ組（T-SOD，p=0.019；CAT，p=0.019；GPx，p=0.004）。熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶基因mRNA表達(dá)水平結(jié)果顯示：Aβ組抗氧化酶基因mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組（SOD1，P＜0.001；SOD2，P＜0.001；CAT，P＜0.001；GPx，P＜0.001），OECCM組細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶 mRN

5、A表達(dá)水平高于 Aβ組（SOD1，p=0.001；SOD2，P＜0.001；CAT，P＜0.001；GPx，P＜0.001）。蛋白免疫印跡檢測(cè)結(jié)果顯示：Aβ組細(xì)胞內(nèi) SOD1、SOD2蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組（SOD1，P＜0.001；SOD2，p=0.046），OECCM組細(xì)胞內(nèi)SOD1、SOD2蛋白表達(dá)水平高于Aβ組（SOD1，p=0.038；SOD2，p=0.042）。
　?。?）Aβ組細(xì)胞內(nèi) Fluo-4熒光強(qiáng)度分別與對(duì)照組

6、（p=0.19）和OECCM組（p=0.769）比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)的 Fluo-4熒光強(qiáng)度與OECCM組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.443）。
　?。?）熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)線粒體凋亡相關(guān)基因mRNA水平結(jié)果表明：Aβ組細(xì)胞內(nèi)Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-3及Bax的mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組（Cytochrome C，P＜0.001；Caspase-9，P＜0.001；Caspa

7、se-3，P＜0.001；Bax，P＜0.001）和OECCM組（Cytochrome C，P＜0.001；Caspase-9，P＜0.001；Caspase-3，P＜0.001；Bax，P＜0.001），而 Bcl-2的 mRNA表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P＜0.001)和OECCM組（P＜0.001）。蛋白免疫印跡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)線粒體凋亡相關(guān)蛋白結(jié)果顯示：Aβ組細(xì)胞內(nèi)的Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-3及Bax

8、的蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組（Cytochrome C，P＜0.001；Caspase-9，P＜0.001；Caspase-3，P＜0.001；Bax，P＜0.001）和OECCM組（Cytochrome C，P＜0.001；Caspase-9，P＜0.001；Caspase-3，P＜0.001；Bax，P＜0.001），而 Bcl-2的蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組（p=0.039）和OECCM組（p=0.004）。免疫熒光結(jié)果顯示：Aβ組的