丹參-葛根對藥改善糖尿病大鼠主動脈病變之作用與機制研究.pdf

1、第一部分丹參-葛根對藥改善糖尿病大鼠主動脈病變的作用與機制研究
　　目的：探討中藥丹參-葛根對藥水提物（DG）對鏈脲佐菌素（streptozotocin, STZ）誘導的糖尿病大鼠模型主動脈病變的作用及其可能的作用機制。
　　方法：丹參、葛根按1∶1重量比采用水提法制備DG。SD大鼠腹腔注射STZ（50 mg/kg/day），連續(xù)兩天，制備糖尿病大鼠模型。以STZ注射72 h后空腹血糖值≥11.1 mmol/L者視為糖尿病模

2、型大鼠。實驗大鼠隨機分為四組：對照組、模型組、DG低劑量組（50 mg/kg），DG高劑量組（200 mg/kg）。對照組及模型組灌胃給予等體積生理鹽水，每天一次，連續(xù)5?6周。每周測一次血糖和體重。制備離體主動脈環(huán)，測定動脈環(huán)對乙酰膽堿（Ach）的舒張反應；測定血漿丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxyde dismutase，SOD）、胰島素（insulin，INS）、過氧化氫（hydro

3、gen peroxide，H2O2）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、細胞間粘附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1）、血管細胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1）水平；HE染色法觀察主動脈的病理學變化；免疫印跡方法檢測主動脈中ICAM-1、VCAM-1、NADPH氧化酶2（ NADPH oxida

4、se2, NOX2）、NADPH氧化酶4（NADPH oxidase2, NOX4）、蛋白激酶C-β（protein kinase C-β, PKC-β）蛋白的表達。
　　結果：結果顯示，大鼠連續(xù)2次給予STZ后，血糖明顯升高，均值達到13.99 mmol/L，體重明顯下降。DG給藥5-6周后，兩個劑量DG對空腹血糖均無影響，但能顯著降低糖尿病大鼠血漿INS、NO、H2O2、MDA、ICAM-1和VCAM-1的水平，增加糖尿病大鼠

5、血漿SOD水平。模型組胸主動脈環(huán)對Ach的舒張作用明顯強于對照組(P＜0.01)，DG給藥明顯減弱糖尿病大鼠胸主動脈環(huán)的舒張作用(P＜0.01)。HE染色顯示， DG能改善糖尿病大鼠主動脈壁增厚、水腫、細胞核增多、排列紊亂等病理變化；免疫印跡結果顯示DG給藥顯著抑制糖尿病大鼠主動脈ICAM-1、VCAM-1、NOX2、NOX4、PKC-β蛋白的表達。
　　結論：DG對STZ誘導的糖尿病大鼠主動脈病變具有一定的保護作用。其機制可能與

6、抑制PKC-β、NOX2、NOX4表達、降低氧化應激，從而抑制ICAM-1、VCAM-1等細胞粘附分子的表達有關。
　　第二部分丹參-葛根對藥抑制高糖誘導人臍靜脈內皮細胞粘附分子表達的作用及機制研究
　　目的：本研究以體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells， HUVECs）為工具，探討丹參-葛根對藥水提物（DG）抑制高糖誘導HUVECs粘附分子表達的作用及其可

7、能機制。
　　方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞，給予不同濃度DG處理24h，顯微鏡觀察形態(tài)學變化；MTT法測定DG對內皮細胞的毒性作用。細胞分為5組，分別為對照組（Con）（5.5 mmol/L葡萄糖）、模型組（Mod)（30 mmol/L葡萄糖）、DG低劑量組（DG-L）（DG10μg/mL+30 mmol/L葡萄糖）、DG中劑量組（DG-M）（DG25μg/mL+30 mmol/L葡萄糖）、DG高劑量組（DG-H）（DG50μg

8、/mL+30 mmol/L葡萄糖）。共同作用12 h后，熒光探針DCFH2-DA檢測細胞內活性氧（reactive oxygen species，ROS）的生成。DAPI熒光標記的THP-1單核細胞，與內皮細胞共培養(yǎng)30 min后，用熒光顯微鏡觀察DG對高糖誘導的單核-內皮粘附作用的影響。Western blot法檢測ICAM-1、VCAM-1、NOX2、NOX4和PKC-β蛋白的表達。結果：DG處理內皮細胞后，形態(tài)無明顯改變；MTT結

9、果顯示，DG處理內皮后輕度促進內皮細胞增殖；高糖誘導內皮細胞內ROS生成，這可被乙酰半胱氨酸（N-acetyl cysteine,NAC）所抑制，DG顯著抑制高糖誘導內皮細胞的ROS生成；DG顯著抑制高糖誘導的單核-內皮粘附作用。Western blot結果顯示，高糖顯著誘導內皮細胞ICAM-1、VCAM-1、NOX2、NOX4和PKC-β蛋白的表達，DG可顯著逆轉高糖誘導的ICAM-1、VCAM-1、NOX2、NOX4和PKC-β蛋白