蹄葉橐吾葉多糖的提取及其體外生物學(xué)活性研究.pdf

1、近幾年，我國空氣霧霾情況逐年加劇，人們?nèi)諠u重視對咽喉、肺部的保健，提高了對加強(qiáng)自身免疫力的意識。蹄葉橐吾的根及根莖在吉林省藥材標(biāo)準(zhǔn)中記載為山紫莞，主“溫肺下氣，消痰止嗽”，它的葉片具有特殊風(fēng)味，是延吉人民喜食的一種野菜，有研究表明蹄葉橐吾葉片提取物具有消炎和提高免疫力等功效，目前主要集中為有機(jī)溶劑提取物，本文以水提物為研究對象，提取、精制并分級蹄葉橐吾葉多糖（PLF），最后從抗氧化能力及對細(xì)胞存活率的影響兩方面初步探討其生物學(xué)活性。主要

2、研究了以下幾方面內(nèi)容。
　　研究了PLF的提取及精制工藝。首先，對葉片定性檢出酚類、多糖類、黃酮類、生物堿等活性成分；水提醇沉提取PLF，采用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化PLF最佳提取工藝為料液比1:20（g/mL）條件下，在90℃水浴鍋中提取2h，收集濾液3次，PLF提取率為8.76％；殼聚糖絮凝純化PLF得到精制蹄葉橐吾葉多糖（DPLF），采用正交試驗(yàn)優(yōu)化最優(yōu)精制工藝為在50mL PLF（濃度為2mg/mL）中加入殼聚糖（濃度為2%）1mL

3、，30℃條件下攪拌，絮凝60min后蛋白質(zhì)去除率為85.03%，脫色率為81.74%，多糖損失率為42.81%；通過定性實(shí)驗(yàn)、紫外全波長掃描（UV-Vis）、紅外光譜掃描（FTIR）和高效液相色譜（HPLC）等技術(shù)確定DPLF的理化性質(zhì)，初步判斷其除雜程度，特征基團(tuán)及單糖組成成分。
　　采用離子交換層析柱梯度洗脫DPLF，結(jié)合瓊脂糖凝膠柱層析進(jìn)一步分級，最終得到DPLFN，DPLFA1-1，DPLFA1-2，DPLFA2-1，DP

4、LFA3-1，DPLFA3-2，DPLFA4-1和DPLFA5-1八個(gè)組分。通過UV-Vis、FTIR、HPLC和高效凝膠滲透色譜（HPGPC）確定了其中五種組分幾乎不含干擾類雜質(zhì)；推測出可能含有的特征基團(tuán)；明確了單糖組成成分，其中主要包含的單糖種類有：甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、巖藻糖和阿拉伯糖等；計(jì)算出該四種組分相對分子量（Mw）依次為4.0992×105，1.3016×106，3.4410×104和1.0280×1

5、04。
　　研究了DPLF的生物學(xué)活性。（1）DPLF的抗氧化活性：從總抗氧化能力、還原力和對DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥基自由基的清除能力五方面綜合評價(jià)，結(jié)果表明DPLF具有一定的抗氧化能力，尤其對DPPH自由基清除能力較強(qiáng)，半抑制濃度為0.0351mg/mL；（2）采用MTT比色法測定DPLF對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞存活率的影響：當(dāng)濃度為2μg/L時(shí)，影響顯著，細(xì)胞存活率為100.3135%，此時(shí)ConA刺激細(xì)胞增殖