竹筍多糖的提取、純化、結(jié)構(gòu)及體外生物活性的研究.pdf

1、本文以竹筍為原料，研究了竹筍多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)及體外生物活性。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1、竹筍多糖的提取和分離純化工藝研究。首先，采用水提法提取竹筍多糖。分別考察了液固比、提取溫度、提取時(shí)間、浸提次數(shù)和95％乙醇添加倍數(shù)五個(gè)因素對(duì)多糖提取率的影響;在此基礎(chǔ)上，以液固比、提取溫度、提取時(shí)間和95％乙醇添加倍數(shù)為因素，采用正交試驗(yàn)，確定了竹筍多糖最佳提取工藝條件，即液固比15∶1，提取溫度100℃，提取時(shí)間4h，95

2、％乙醇添加倍數(shù)4，在此條件下多糖提取率為7.58％。然后，將浸提液離心取上清液，再依次采用Sevage法脫蛋白，大孔樹(shù)脂吸附法脫色，透析法脫鹽，95％乙醇沉淀，冷凍干燥得到竹筍粗多糖(WBP)。采用DEAE-cellulose-52層析柱對(duì)WBP作進(jìn)一步的分離，用蒸餾水和不同濃度NaCl溶液洗脫，將最大的兩個(gè)洗脫峰對(duì)應(yīng)的洗脫液分別收集、濃縮和冷凍干燥，得到兩種主要組分，并用Sephadex G-100進(jìn)一步純化得到兩種組分（WBP1和W

3、BP2）。脫蛋白實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，最佳脫蛋白次數(shù)是4次。比較AB-8和D101兩種樹(shù)脂的脫色效果，結(jié)果表明，D101為最佳脫色大孔樹(shù)脂，當(dāng)D101樹(shù)脂∶多糖濃縮液=3∶5(g/mL)時(shí)，脫色效果較好。
　　 2、竹筍多糖的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)的初步研究。考察了WBP1和WBP2的總糖、蛋白質(zhì)、硫酸根和糖醛酸含量。用高效液相色譜(HPLC)進(jìn)一步證實(shí)，WBP1和WBP2均為多糖單組分，分子量分別為83.44kDa和80.01kDa。采用氨基

4、酸全自動(dòng)分析儀分析了兩者的氨基酸組成，兩者都含有天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸和精氨酸等15種氨基酸，且丙氨酸含量最高;用傅立葉紅外光譜初步判斷兩者為糖類化合物，且含有羰基、-CH、C-O-C和-OH;用GC確定兩者的單糖組成，WBP1和WBP2是雜多糖，都含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖6種單糖，其摩爾比分別約為5.05∶6.06∶10.13∶97.19∶28.11∶33.41和4.39∶13.65∶12.43∶55.34

5、∶4.16∶27.33。
　　 3、竹筍多糖的體外抗氧化活性研究。通過(guò)對(duì)羥基自由基、超氧陰離子自由基和過(guò)氧化氫的清除作用及還原力的體外抗氧化活性研究，結(jié)果表明，WBP1和WBP2不僅對(duì)羥基自由基、超氧陰離子自由基和過(guò)氧化氫都表現(xiàn)出一定的清除作用，而且有一定的還原力。此外，還發(fā)現(xiàn)對(duì)羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除作用和多糖分子中蛋白質(zhì)含量之間，還原力和硫酸根含量之間存在正相關(guān)性;對(duì)過(guò)氧化氫的清除作用和多糖的相對(duì)分子質(zhì)量之間存在負(fù)

6、相關(guān)性。
　　 4、竹筍多糖的免疫活性研究。通過(guò)四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT法）評(píng)價(jià)WBP1和WBP2對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響，進(jìn)而評(píng)價(jià)其免疫活性。結(jié)果表明，WBP1和WBP2能增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力。當(dāng)濃度為200μg/mL時(shí)，對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用達(dá)到最大。
　　 5、竹筍多糖對(duì)雙歧桿菌體外生長(zhǎng)情況的研究。以兩歧雙歧桿菌和青春雙歧桿菌為考察對(duì)象，培養(yǎng)基OD值和pH值為評(píng)價(jià)指標(biāo)，研究WBP1和WBP2對(duì)雙歧桿菌

7、體外生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，WBP1和WBP2對(duì)兩種雙歧桿菌的體外生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，是一種潛在的有效益生元。竹筍多糖作為雙歧桿菌培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)源，當(dāng)WBP1和WBP2濃度分別為2.0％和3.0％時(shí)，對(duì)兩歧雙歧桿菌增殖效果最好;WBP1和WBP2濃度為2.0％時(shí)，對(duì)青春雙歧桿菌的增殖效果最好。另外，雙歧桿菌發(fā)酵竹筍多糖，產(chǎn)生乳酸等，使培養(yǎng)基的pH值降低。對(duì)兩種雙歧桿菌生長(zhǎng)曲線的研究發(fā)現(xiàn)，竹筍多糖WBP1對(duì)雙歧桿菌的促進(jìn)作用比WBP2好;以