關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方對(duì)大鼠膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的療效探討及對(duì)關(guān)節(jié)軟骨組織中MMP-3、MMP-13、TIMP-1表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方對(duì)大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎模型的療效及對(duì)關(guān)節(jié)軟骨組織中MMP-3、MMP-13和TIMP-1表達(dá)的影響變化；
　　方法：將54只SD大鼠隨機(jī)抽出9只作為正常組，其余45只均取右后膝關(guān)節(jié)參照Hulth法造模，造模結(jié)束隨機(jī)處死6只大鼠，檢測(cè)造模成功后，將KOA模型大鼠再次隨機(jī)分為5組，分別為模型組、關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組，每組8只。依照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行藥物干預(yù)治療，治療期間觀察記錄各組動(dòng)物造模關(guān)節(jié)局部表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)

2、前后動(dòng)物行為等變化情況。給藥6周后，采用脫頸法處死取材并進(jìn)行相關(guān)因子檢測(cè)：（1）軟骨表面的肉眼觀察及評(píng)分：大鼠處死后，切開(kāi)各組大鼠的右后膝關(guān)節(jié)，請(qǐng)三名經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的人員遵循雙盲原則進(jìn)行肉眼觀察關(guān)節(jié)軟骨一般表現(xiàn)及變化，并參照文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[64-65]進(jìn)行肉眼評(píng)分；（2）取軟骨組織制作光學(xué)顯微鏡切片，在光鏡下觀察軟骨組織的病理學(xué)變化，并按照Mankin’s軟骨組織評(píng)分對(duì)各組大鼠軟骨組織的病理變化進(jìn)行評(píng)分；（3）取造模關(guān)節(jié)軟骨組織制作切片，采用免疫組

3、化法檢測(cè)分析MMP-3、MMP-13、TIMP-1在軟骨組織中的表達(dá)情況；（4）采用qRT-PCR法檢測(cè)分析關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中MMP-3、MMP-13、TIMP-1基因相對(duì)表達(dá)量的變化情況；
　　結(jié)果：
　?。?）造模前、后及給藥后造模關(guān)節(jié)局部表現(xiàn)的變化情況：分組造模前所有大鼠右后膝關(guān)節(jié)活動(dòng)及外形正常，造模成功時(shí)除正常組外其余大鼠均有程度相差不大的右后膝關(guān)節(jié)骨性膨大、內(nèi)翻畸形、大鼠跛行、造模關(guān)節(jié)活動(dòng)度差等KOA樣變，給藥結(jié)束時(shí)正

4、常組大鼠右后膝關(guān)節(jié)與分組前比較無(wú)明顯變化，行藥物干預(yù)治療的各組大鼠右后膝關(guān)節(jié)均有不同程度的KOA樣變，但是均較模型組KOA樣變程度輕。
　?。?）肉眼評(píng)分結(jié)果顯示：模型組及其他各治療組大鼠軟骨的肉眼評(píng)分均較正常組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組肉眼評(píng)分均較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），關(guān)節(jié)I號(hào)方中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組肉眼評(píng)分較關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低劑量組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

5、P＜0.05）。
　　（3）各組Mankin’s評(píng)分結(jié)果顯示：模型組及藥物干預(yù)的各組Mankin’s評(píng)分均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組Mankin’s評(píng)分相對(duì)于模型組均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組Mankin’s評(píng)分均低于關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　（4）免疫組化法檢測(cè)結(jié)果顯示：正常組各大鼠右

6、后膝關(guān)節(jié)均有少許MMP-3、MMP-13、TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)；模型組及各治療組MMP-3、MMP-13、TIMP-1表達(dá)量均較正常組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組MMP-3、MMP-13表達(dá)量較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TIMP-1表達(dá)量較模型組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組MMP-3、MMP-13表達(dá)量較關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低組均降

7、低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TIMP-1表達(dá)量較關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低組均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　?。?）qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：模型組MMP-3、MMP-13基因表達(dá)量較正常組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組MMP-3、MMP-13基因表達(dá)量較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）、TIMP-1基因表達(dá)量較模型組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；關(guān)

8、節(jié)Ⅰ號(hào)方中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組MMP-3、MMP-13基因表達(dá)量較關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低劑量組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TIMP-1基因表達(dá)量較關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方低劑量組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　（1）模型組及其他藥物干預(yù)組中MMP-3、MMP-13、TIMP-1表達(dá)情況較正常組有較明顯改變，證明MMP-3、MMP-13、TIMP-1與KOA病變過(guò)程密切相關(guān)；
　?。?）關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方能在一定

9、程度上控制大鼠膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病情發(fā)展，延緩病灶處軟骨組織的退變，對(duì)KOA的治療效果明確；
　?。?）關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方在防治大鼠KOA的病情發(fā)展、延緩軟骨組織退變的機(jī)制之一為：下調(diào)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中MMP-3、MMP-13的表達(dá)、促進(jìn)TIMP-1的表達(dá)；
　?。?）陽(yáng)性對(duì)照組關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)學(xué)變化及相關(guān)細(xì)胞因子變化與關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方中、高劑量組相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示關(guān)節(jié)Ⅰ號(hào)方中、高劑量對(duì)大鼠KOA的治療效果與鹽酸氨