復(fù)肝春3號方對肝硬化腹水大鼠AQP8、ET-1、NO的影響.pdf

1、目的：本研究采用改良的CCl4-酒精綜合法制備肝硬化腹水大鼠模型，給予中藥復(fù)肝春3號方（FGC-3）及復(fù)方鱉甲軟肝片對該模型進行干預(yù)治療，通過觀察各組大鼠的一般情況、腹腔積液量、肝功能指標(biāo)、肝纖維化指標(biāo)、一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素-1（ET-1）、水通道蛋白8（AQP8）、肝臟病理的變化，探討 FGC-3對肝硬化腹水大鼠肝臟、腹水的作用及其可能的作用機制，并為臨床上中醫(yī)藥治療肝硬化腹水提供實驗依據(jù)。
　　方法：清潔級雄性Wistar

2、大鼠75只，體重為200-220g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機選取8只大鼠為正常對照組（N），剩余的大鼠經(jīng)腹部皮下注射40％ CCl4-橄欖油溶液造模組，每4日1次，首次劑量為0.5ml/100g，從第2次開始注射劑量改為0.3ml/100g，每次注藥時嚴(yán)格測量體重以調(diào)整劑量，以15%乙醇作為飲料讓大鼠自由飲用，飼料均為普通飼料，持續(xù)10周。通過查腹水征及腹腔診斷性穿刺確定41只大鼠存在腹水，并將其隨機分為5組：模型組（M組）9只，F(xiàn)GC-3

3、高劑量組（G組）8只，F(xiàn)GC-3中劑量組（Z組）8只，F(xiàn)GC-3低劑量組（D組）8只，復(fù)方鱉甲軟肝片組（F組）8只。各組給予相應(yīng)藥物灌胃，每日1次。藥物干預(yù)1個月后，所有大鼠禁食12小時以上，稱重大鼠后摘眼球取血測量血液指標(biāo)，脫頸處死各組大鼠，剖開腹腔，抽取腹腔積液；觀察肝臟的顏色、質(zhì)地，取大鼠肝組織，置于凍存管，并迅速將其低溫保存于液氮罐內(nèi)，用于檢測AQP8。選取同一部位肝組織，浸泡于4%中性甲醛固定液中，以做HE染色切片。
　

4、　結(jié)果：
　　1.一般情況的比較:本實驗造模大鼠死亡率為20.9%，腹水形成率為61.19%。N組大鼠精神狀態(tài)良好，活動正常，皮毛、飲食、二便無明顯改變，體重逐漸增加。M組大鼠出現(xiàn)明顯的精神萎靡、易驚、活動減少、皮毛干枯毛躁泛黃易脫落、飲食減少、大便灰白、體重先減輕后增加。經(jīng)治療，各治療組大鼠上述情況較模型組均有不同程度改善。
　　2.肝組織外觀形態(tài)的比較:肉眼觀察大鼠肝組織，N組肝臟質(zhì)地好，色鮮紅，表面光滑，邊緣銳利，大小

5、適中；M組肝臟質(zhì)脆，色暗紅或褐色，表面凹凸不平，可見大小不等的結(jié)節(jié)，邊緣較鈍；D組肝臟腫大、質(zhì)脆，色褐色，表面粗顆粒狀，邊緣較鈍；G、Z、F組肝臟腫大，色深紅，表面尚光滑，可見不同程度細小顆粒狀區(qū)域，邊緣較銳利。
　　3.腹水量的比較:M組大鼠腹水量明顯增加，較N組差異有統(tǒng)計學(xué)意義；治療后，G、Z、D、F組大鼠腹水量均有不同程度減少，其中G、Z、D組腹水量顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；F組腹水量較 M組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　

6、　4.肝功能指標(biāo):與N組比較，其余各組AST、ALT值均有不同程度升高，其中M、F、Z、D組與N組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，G組與N組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各治療組AST、ALT值較M組均有不同程度降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意。各組ALB值較N組均有不同程度下降，其中M、F、Z、D組與N組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，G組與N組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各治療組ALB值較M組均有不同程度升高，G、Z組與M組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，D、F組與M組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意

7、義。
　　5.肝纖維化指標(biāo):各組肝纖維化指標(biāo)較 N組均有不同程度升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；各治療組肝纖維化指標(biāo)較 M組均有不同程度降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中G組改善最明顯。
　　6.對血清NO的影響:M組血清NO含量明顯高于N組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，各治療組血清NO含量較M組均有不同程度降低，其中G、Z、D組與M組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，F(xiàn)組與M組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　7.對血清ET-1的影響:與 N組相比，M組血清

8、 ET-1含量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與M組相比，各治療組血清ET-1含量均有不同程度降低，其中G、Z、D組與M組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，F(xiàn)組與M組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　8.對肝組織AQP8的影響：免疫組化結(jié)果顯示，N組大鼠肝細胞周圍可見棕黃色顆粒，提示在該區(qū)域 AQP8有表達，相比較而言，M組AQP8表達量明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；G、Z組與 M組相比，差異顯著;F、D組與M組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　圖像分

9、析數(shù)據(jù)表明，M組肝臟AQP8積分光密度值（IOD）較N組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；G、Z組IOD較M組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；F、D組IOD較M組稍升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.用改良的CCl4-酒精綜合法可以制備穩(wěn)定的肝硬化腹水大鼠模型。
　　2.FGC-3可明顯改善肝硬化腹水大鼠的一般情況，且能明顯減少腹腔積液量，促進模型大鼠腹水的消退。
　　3.FGC-3可顯著降低模型大鼠AST、A