低溫乳糖酶產(chǎn)生菌的分離鑒定及酶的提純與特性研究.pdf

1、從新疆低溫環(huán)境中篩選到一株可產(chǎn)低溫乳糖酶的菌株14-1,利用形態(tài)學(xué)方法,生理生化實驗、16S rDNA基因序列同源性比對及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建對菌株進行鑒定,結(jié)果顯示該菌屬于水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis),命名為Rahnella aquatilis sp.14-1。 對低溫乳糖酶產(chǎn)生菌Rahnella aquatilis sp.14-1進行了搖瓶條件下產(chǎn)低溫乳糖酶的研究,確定了搖瓶最佳發(fā)酵工藝：乳糖含量為2.5％

2、,接種量3％,培養(yǎng)基初始pH為6.5,裝液量為在500 mL,三角瓶裝液體培養(yǎng)基100 mL。20℃,200r·min-1搖床培養(yǎng)48h,14-1菌產(chǎn)低溫乳糖酶活性4.51 U·mL-1。 Rahnella aquatilis 14-1 sp.乳糖酶為胞內(nèi)酶,將菌體用超聲波破壁提取粗酶液,用硫酸銨分級沉淀,Sephadex G-25和DEAE-Cellulose柱層析進一步純化。經(jīng)過純化的酶用SDS-PAGE檢驗其純度,結(jié)果為電

3、泳單條帶,該酶的單亞基表觀分子量約為60 KDa。酶的純化倍數(shù)為4.19,回收率25％。 Rahnella aquatilis sp.14-1乳糖酶的酶學(xué)性質(zhì)研究表明,以O(shè)NPG為底物,酶的最適反應(yīng)溫度為35℃,對熱敏感,45℃保溫2h,酶完全失去活力；最適反應(yīng)pH值為6.5～7.0,在pH值低于5和高于9酶不穩(wěn)定。金屬離子Mn2+對酶有激活作用,活力提高了19.8％。而Cu2+、Zn2+、Fe3+、Al3+離子對酶活力有明顯的