IL-17F在胃癌組織中的表達及其對胃癌細胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:
　　檢測IL-17F在胃癌中的表達，探討IL-17F促進胃癌進展的作用機制。
　　方法:
　　1、采用RT-PCR和western-blot方法分別檢測IL-17FmRNA和蛋白在胃癌患者癌組織和癌旁對照組織中的表達，分析其與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　　2、采用MTT法，檢測不同濃度外源性IL-17F(1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、200ng/ml)對SGC7901細胞的增殖活

2、性的影響。
　　3、用RT-PCR和western-blot方法檢測IL-17F siRNA基因沉默后SGC-7901細胞中IL-17F的mRNA和蛋白表達情況。
　　4、采用western-blot分別檢測:沉默IL-17R基因后，IL-17F作用SGC7901細胞后空載體轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染組中細胞STAT3的表達情況;阻斷TPL2活性后，IL-17F作用SGC7901細胞后，細胞STAT3表達的情況。
　　5、采用細胞劃

3、痕實驗和Transwell侵襲實驗分別檢測，IL-17R基因沉默前后和TPL2抑制劑TKI處理前后，IL-17F對SGC7901細胞遷移能力和侵襲能力的影響。
　　6、采用ELISA法檢測，IL-17R基因沉默前后和TPL2抑制劑TKI處理前后，IL-17F對SGC7901細胞分泌IL-6、IL-8和VEGF的影響。
　　結(jié)果:
　　1、RT-PCR實驗結(jié)果顯示，與癌旁對照組織相比，胃癌組織內(nèi)IL-17F、VEGF和I

4、L-6 mRNA表達顯著增高(0.6286±0.2448 vs0.1553±0.0286、0.2965±0.0527vs0.1438±0.0295、0.4555±0.1897 vs0.2357±0.0695)并且IL-17F mRNA表達水平與VEGF和IL-6 mRNA表達水平明顯相關(guān)(P＜0.01)。
　　2、Western-blot實驗結(jié)果顯示，與癌旁對照組織相比，胃癌組織內(nèi)IL-17F蛋白表達顯著增高（0.3861±0.1

5、978 vs0.1347±0.0563）(P＜0.05)。
　　3、直線相關(guān)分析結(jié)果顯示，胃癌組織內(nèi)IL-17FmRNA和蛋白表達水平與患者TNM分期明顯相關(guān)，而與患者的性別、年齡和腫瘤大小無相關(guān)性。
　　4、MTT實驗結(jié)果顯示，不同濃度（1ng/ml，10ng/ml，100ng/ml，200ng/ml）IL-17F作用24h，對SGC7901細胞的體外增殖活性無明顯影響，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5、IL-17R si

6、RNA基因轉(zhuǎn)染后，SGC7901細胞IL-17R表達
　　將IL-17R siRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SGC7901細胞后，檢測IL-17R表達，結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染空載體組相比，轉(zhuǎn)染IL-17R siRNA質(zhì)粒的SGC7901細胞中表達水平明顯降低
　　6、沉默IL-17R基因后IL-17F對SGC7901細胞遷移能力的影響
　　將IL-17R siRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SGC7901細胞后，檢測IL-17F對細胞遷移能力的影響，

7、結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染空載體組相比，轉(zhuǎn)染IL-17R siRNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后，向劃痕中間遷移的距離明顯縮小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　7、沉默IL-17R基因后IL-17F對SGC7901細胞侵襲能力的影響
　　將IL-17R siRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SGC7901細胞后，檢測IL-17F對細胞侵襲能力的影響，結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染空載體組相比，轉(zhuǎn)染IL-17R siRNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后

8、，穿膜細胞數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　8、沉默IL-17R基因后IL-17F對SGC7901細胞STAT3表達的影響
　　將IL-17R siRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SGC7901細胞后，檢測IL-17F對細胞STAT3表達的影響，結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染空載體組相比，轉(zhuǎn)染IL-17RsiRNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后，磷酸化STAT3蛋白表達水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　9、沉默IL-17R基因后I

9、L-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響
　　將IL-17R siRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SGC7901細胞后，檢測IL-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響，結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染空載體組相比，轉(zhuǎn)染IL-17R siRNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后，SGC7901細胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-8、VEGF的分泌水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　10、阻斷TPL2活性后，IL-17F對SGC7901細胞

10、遷移能力的影響。
　　采用10μmol/LTKI處理SGC7901細胞后，細胞劃痕實驗檢測IL-17F對SGC7901細胞遷移能力的影響，結(jié)果顯示，與對照組相比，TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后向劃痕中央遷移的距離明顯縮小。(560.8±13.274vs836±12.227)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　11、阻斷TPL2活性后IL-17F對SGC7901細胞侵襲能力的影響
　　采用10μmol/LTKI處理SGC79

11、01細胞后，transwell實驗檢測IL-17F對SGC7901細胞侵襲能力的影響，結(jié)果顯示，與對照組相比，TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后SGC7901細胞穿膜細胞數(shù)明顯減少(117±11.8321vs222.4±28.8756)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　12、阻斷TPL2活性后IL-17F對SGC7901細胞STAT3表達的影響
　　采用10μmol/LTKI處理SGC7901細胞后，western-blot實驗檢

12、測IL-17F對SGC7901細胞STAT3表達的影響，結(jié)果顯示，與對照組相比，TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后，磷酸化STAT3表達水平明顯降低。
　　13、阻斷TPL2活性后IL-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響
　　采用10μmol/LTKI處理SGC7901細胞后，ELISA實驗檢測IL-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響，結(jié)果顯示，與對照組相比，TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后，SGC

13、7901細胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-8和VEGF的分泌水平（分別為171.9±9.5vs129.8±9.35，324.5±11.82vs301.3±12.37，448.1±13.55vs400±9.63pg/ml）顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1、胃癌組織內(nèi)IL-17F表達量增高并與患者TNM分期相關(guān)，提示IL-17F可能促進胃癌的進展。
　　2、胃癌組織中IL-17F表達量增高與VEGF和IL-6表