血液感染優(yōu)勢細(xì)菌和真菌各類分析及Verigene-DNA芯片快速檢測效果的研究.pdf

1、目的：了解杭州市第三人民醫(yī)院2008～2014年血液感染細(xì)菌和真菌的種類及其耐藥性，探討Verigene-DNA芯片快速檢測血液感染革蘭陽性菌的效果。
　　方法：采用BacT/ALERT3D血液標(biāo)本培養(yǎng)系統(tǒng)及單側(cè)單瓶、單側(cè)雙瓶和雙側(cè)雙瓶法，分別對臨床送檢19789人份外周血標(biāo)本中細(xì)菌和真菌進行分離培養(yǎng)，VITEK2Compact系統(tǒng)對獲得的純培養(yǎng)菌株進行鑒定，分別采用VITEK2 Compact系統(tǒng)和紙片擴散法檢測各菌株對不同抗生

2、素的敏感性。采用CLSI推薦的紙片擴散法確證試驗檢測細(xì)菌分離株β-內(nèi)酰胺酶活性。采用統(tǒng)計學(xué)軟件對不同血培養(yǎng)模式的分離培養(yǎng)陽性率、優(yōu)勢感染細(xì)菌或真菌種類、分離菌株藥物敏感性進行分析。另采用Verigene-DNA芯片對分離的98株革蘭陽性菌進行鑒定并檢測其耐藥基因，菌種鑒定結(jié)果與VITEK2 Compact系統(tǒng)進行比較，耐藥基因檢測結(jié)果用PCR復(fù)核。
　　結(jié)果：上述19789外周血標(biāo)本中，雙側(cè)雙瓶法送檢的細(xì)菌和真菌血培養(yǎng)陽性率(29

3、。22％)顯著高于單側(cè)單瓶法(8.28％)和單側(cè)雙瓶法(12.34％)(p＜0.01)。分離的124種1876株細(xì)菌中，人葡萄球菌（Staphylococcus hominis）、大腸埃希菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）、溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)、肺炎克雷

4、伯菌(Klebsiella pneumonia)、頭狀葡萄球菌（Staphylococcus capitis）、屎腸球菌（Enterococcus faecium）、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii)和糞腸球菌（Enterococcus faecalis）分離率為11.46％～3.00％，其余114種細(xì)菌分離率均在2.3％以下。分離的18種136株真菌中，近平滑念珠菌（Candida parapsilosis

5、）、白色念珠菌（Candida albicans）、光滑念珠菌（Candida glabrata）和季也蒙念珠菌（Candida guilliermondii）分離率分別為25.00％、21.32％、16.91％和11.76％，其余14種真菌分離率均在8％以下。所有葡萄球菌屬菌株均對利奈唑胺、萬古霉素和替加環(huán)素敏感，但耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(methicillin-resistant CoNS，MRCoNS)檢出率(87.88％，

6、116/132)明顯高于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus,MRSA)(54.77％,109/199)(p＜0.01)。92株屎腸球菌和56株糞腸球菌中，替加環(huán)素敏感率均為100％，利奈唑胺敏感率分別為97.01％和95.56％，萬古霉素耐藥腸球菌（vancomycin-resistant enterococcus，VRE）檢出率分別為15.22％(14/92)和8.93％(5/56)

7、。208株大腸埃希菌對亞胺培南、厄他培南、替加環(huán)素、頭孢替坦、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦和呋喃妥因的敏感率為92.31％～99.52％，但有1.03％和0.48％菌株對碳青霉烯類抗菌藥物厄他培南和亞胺培南耐藥，其中54.31％菌株檢出有β-內(nèi)酰胺酶活性。122株肺炎克雷伯菌對阿米卡星、頭孢替坦、替加環(huán)素和復(fù)方新諾明敏感率為77.05％～79.51％，但有32.71％和31.15％分別對碳青霉烯類抗菌藥物厄他培南和亞胺培南耐藥，其中28

8、.21％菌株檢出有β-內(nèi)酰胺酶活性。71株鮑曼不動桿菌對多粘菌素B、替加環(huán)素、阿米卡星和頭孢哌酮/舒巴坦的敏感率為60％～100％。29株白色念珠菌對氟康唑、伊曲康唑、克霉唑、5-氟胞嘧啶、制霉菌素和兩性霉素B的敏感率均為100％;34株近平滑念珠菌對5-氟胞嘧啶和制霉菌素敏感率均為100％，但對兩性霉素B、伊曲康唑、氟康唑和克霉唑敏感率為85.71％～97.06％;23株光滑念珠菌對5-氟胞嘧啶、兩性霉素B和制霉菌素敏感率均為100％

9、，但對克霉唑、伊曲康唑和氟康唑敏感率為56.52％～85.71％;16株季也蒙念珠菌對5-氟胞嘧啶和兩性霉素B敏感率均為93.75％，但對氟康唑和伊曲康唑敏感率均僅為6.25％。Verigene-DNA芯片對16種98株革蘭陽性菌鑒定結(jié)果與VITEK2 Compact系統(tǒng)鑒定結(jié)果總符合率為91.84％(90/98)，其中對葡萄球菌屬、腸球菌屬和鏈球菌屬菌株檢測符合率分別為91.67％(55/60)，92.59％(25/27)和90.00

10、％(9/10)。Verigene-DNA芯片法鑒定需時約3.1h，但VITEK2 Compact系統(tǒng)鑒定需時約43h。22株金黃色葡萄球菌和12株表皮葡萄球菌中，Verigene-DNA芯片法分別檢出21和8株攜帶甲氧西林耐藥相關(guān)mecA基因，PCR檢測結(jié)果與其完全一致;9株糞腸球菌和16株屎腸球菌中，Verigene-DNA芯片法分別檢出1和5株攜帶萬古霉素耐藥相關(guān)vanA基因，PCR檢測結(jié)果與之相同，但PCR檢測結(jié)果顯示有2株屎腸球

11、菌攜帶vanM基因。
　　結(jié)論：雙側(cè)雙瓶法可提高血標(biāo)本中細(xì)菌和真菌分離培養(yǎng)陽性率。優(yōu)勢血液感染細(xì)菌依次為人葡萄球菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌(＞10％)，優(yōu)勢血液感染真菌依次為近平滑念珠菌、白色念珠菌、光滑念珠菌和季也蒙念珠菌(＞10％)。盡管不同種類的細(xì)菌和真菌臨床菌株對不同抗菌藥物的敏感性有差異，但革蘭陽性菌株對利奈唑胺和替加環(huán)素有較高敏感率，革蘭陰性菌株對替加環(huán)素和阿米卡星有較高敏感率，真菌菌株對5-氟胞嘧啶