復合型非病毒載體的構建及其生物學性能研究.pdf

1、陽離子脂質體對陰離子型聚電解質陰離子敏感,對帶負電荷的DNA有較高的轉運能力,還能轉運RNA、核糖體及其他大電荷的分子和大分子物質進入細胞,其轉染效率比其它脂質體高出許多倍，因而被廣泛應用于基因轉移技術中。但是陽離子脂質體與病毒載體相比，具有轉運效率較低，細胞毒性大等缺點。本課題在合成的陽離子類脂中加入不同助劑制備成新型的復合型非病毒基因載體，以期提高轉運效率，降低細胞毒性。
　　 本實驗從復合型非病毒載體的物化性質與生物性能兩

2、個方面研究復合型非病毒載體以及它與DAN的復合物的結構、粒徑、表面形態(tài)等與轉運效率、細胞毒性的關系，以便為提高轉運效率提供研究依據。主要包括瓊脂糖凝膠電泳分析復合物型非病毒載體與質粒pGFP-N2(報告基因)DNA的結合能力，以商品試劑 Lipofectamine2000和DOTAP為對照，利用脂質體/DNA復合物轉染Hep-2細胞，熒光顯微鏡觀察其基因轉染效率，利用MTT法評價轉染試劑的毒性。
　　 瓊脂糖凝膠電泳結果表明：在

3、陽離子脂質體中加入少量或等量DOPE，延滯DNA能力增強，DOPE量多時反而減弱；用蔗糖酯修飾的陽離子脂質體延滯能力變化不明顯；加入殼聚糖脂質體，延滯DNA的能力明顯增強。原子力顯微鏡結果顯示，陽離子脂質體在云母片上形成的顆粒為球形或橢圓形，粒徑分布較為均勻；陽離子脂質體/DNA復合物在云母片上的顆粒形狀不規(guī)則，粒徑分布不均且比空白脂質體的粒徑大。殼聚糖修飾的脂質體/DNA復合物的粒徑變大，形狀更加的不規(guī)則。加入蔗糖酯與DOPE后，轉染