海南五指山蘇云金芽孢桿菌的分離與對(duì)小菜蛾高毒力菌株的篩選.pdf

1、本研究系統(tǒng)的從海南島五指山熱帶雨林區(qū)采集到433份土樣，利用醋酸鈉選擇培養(yǎng)基的分離方法從中分離到1009株芽孢桿菌，其中產(chǎn)晶體的蘇云金芽孢桿菌（簡(jiǎn)稱Bt，下同）野生菌株30株，伴孢晶體類型有菱型、球型、方型、不規(guī)則型，體現(xiàn)了土壤中Bt菌株資源的多樣性，出菌率為6．93％。SDS-PAGE電泳圖譜顯示，表達(dá)的殺蟲晶體蛋白有130，120，90，80，50，40KDa，顯示出殺蟲晶體蛋白的的多樣性。在對(duì)五指山熱帶雨林區(qū)Bt菌沿海拔分布規(guī)律分

2、析發(fā)現(xiàn)五指山熱帶雨林區(qū)海拔1000米到1500米的土壤中Bt菌株出菌率比較高，低海拔與高海拔的地方Bt菌的出菌率都不高。
　　 利用本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的50對(duì)與中國(guó)農(nóng)科院設(shè)計(jì)的16對(duì)鑒定蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白基因的通用引物，通過(guò)PCR-RFLP的方法對(duì)分離到的蘇云金芽孢桿菌進(jìn)行新的殺蟲晶體蛋白基因的探尋。實(shí)驗(yàn)中對(duì)3個(gè)菌株篩選到的三個(gè)經(jīng)PCR-RFLP分析具有多態(tài)性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析，結(jié)果表面這三條序列不是殺蟲晶體蛋白基因的編

3、碼序列，由于非特異擴(kuò)增，擴(kuò)增到了蘇云金芽孢桿菌基因組的序列中的序列，不是我們希望獲取的殺蟲晶體蛋白基因。
　　 為了分離到有高毒力的菌株，以本實(shí)驗(yàn)室分離到的52株Bt野生菌株（其中30株為本實(shí)驗(yàn)分離，另外22株為實(shí)驗(yàn)室其他同學(xué)分離的菌株）為供試菌株，鱗翅目昆蟲小菜蛾和鞘翅目昆蟲黃粉蟲為供試?yán)ハx，進(jìn)行生物測(cè)定。生物測(cè)定結(jié)果表明這52株對(duì)鞘翅目昆蟲黃粉蟲沒有毒性，而對(duì)鱗翅目昆蟲篩選到了8株高毒力的菌株，48小時(shí)校正致死率達(dá)90％，7