對幾種鱗翅目害蟲高毒力蘇云金芽孢桿菌的篩選及Cry蛋白增效作用的研究.pdf

1、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，簡稱Bt)為革蘭氏陽性菌，是一種具有高度特異性，應(yīng)用范圍最為廣泛的，對環(huán)境友好的微生物殺蟲劑。如今Bt已經(jīng)被應(yīng)用于商業(yè)化的農(nóng)藥制劑生產(chǎn)、森林蚊蟲防治等方面。然而，現(xiàn)有Bt菌株和殺蟲蛋白對很多重要的害蟲沒有切實的殺蟲效果，因此需要分離篩選對常見農(nóng)業(yè)害蟲高毒力的Bt菌株，同時也需要研究不同Cry蛋白組合之間的協(xié)同增效作用。
　　 本實驗選取了篩選自黑龍江涼水國家自然保護區(qū)

2、的31株Bt野生菌株作為研究菌株，對4種常見鱗翅目農(nóng)業(yè)害蟲進行了高毒力菌株的篩選。同時，針對現(xiàn)在國內(nèi)生物測定試蟲的人工飼養(yǎng)比較薄弱的問題，本實驗還選擇了三種不同的Bt Cry蛋白來進行混配毒力實驗，以期發(fā)現(xiàn)有增效或是相加作用的蛋白組合。
　　 1.本課題對小菜蛾、斜紋夜蛾、玉米螟及二化螟有高毒力的蘇云金芽孢桿菌的野生菌株進行篩選。將分離自涼水國家自然保護區(qū)土壤中的31株Bt野生菌株作為研究菌株，定性測定篩選出其中10株Bt野生菌

3、株作為殺蟲活性較高的菌株。鏡檢發(fā)現(xiàn)，這10株Bt菌株均可產(chǎn)生菱形的伴孢晶體。SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)這10株Bt菌株均產(chǎn)生約130kD的晶體蛋白。鑒定其基因型，發(fā)現(xiàn)這些菌株都含有cry1類基因。對菌株的生長曲線分析，發(fā)現(xiàn)這10株Bt菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株HD-73在LB培養(yǎng)基中的生長狀況基本相似。這10株Bt菌株對4種鱗翅目害蟲進行LC50和LT50的測定。分析生物測定數(shù)據(jù)，S2685-1和S2737-3是兩株高毒力菌株，對小菜蛾、玉米螟、二化

4、螟均表現(xiàn)出不錯的殺蟲活性，是可以深入研究的野生菌株。S2685-1和S2737-3可作為標(biāo)準(zhǔn)菌株HD-73的替換菌株，在農(nóng)業(yè)害蟲的綜合防治以及抗性管理方面有一定的意義。
　　 2.本課題對Cry1Ab、Cry2Aa以及Cry50Ba三種殺蟲蛋白的增效作用進行了研究，結(jié)果表明：
　　 對小菜蛾的增效實驗中，Cry1Ab&Cry2Aa表現(xiàn)拮抗作用；
　　 Cry1Ab&Cry50Ba表現(xiàn)相加作用；Cry2Aa&Cry

5、50Ba表現(xiàn)相加作用；
　　 對斜紋夜蛾的增效實驗中，Cry1Ab&Cry2Aa表現(xiàn)拮抗作用；
　　 Cry1Ab&Cry50Ba表現(xiàn)拮抗作用；Cry2Aa&Cry50Ba表現(xiàn)相加作用；
　　 對玉米螟的增效實驗中，Cry1Ab&Cry2Aa表現(xiàn)拮抗作用；
　　 Cry1Ab&Cry50Ba表現(xiàn)拮抗作用；Cry2Aa&Cry50Ba表現(xiàn)拮抗作用；
　　 對二化螟的增效實驗中，Cry1Ab&Cry2