對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)具有高毒力的Bt菌株篩選.pdf

1、害蟲(chóng)防治是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的一項(xiàng)重要的任務(wù)，蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)作為一種與環(huán)境友好的微生物殺蟲(chóng)劑，具有巨大的應(yīng)用前景，在綠色植保中扮演了重要的角色。除用作殺蟲(chóng)劑之外，Bt殺蟲(chóng)基因還被應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)作物的開(kāi)發(fā)。目前，cry1A基因的抗蟲(chóng)棉花在中國(guó)已經(jīng)得到廣泛的種植，有效的解決了棉鈴蟲(chóng)對(duì)棉花生產(chǎn)的危害。但是隨著轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)作物的大面積種植，害蟲(chóng)的抗藥性上升風(fēng)險(xiǎn)不斷增大，向害蟲(chóng)防治提出了新的挑戰(zhàn)。
　

2、　 本文以篩選可用于殺蟲(chóng)劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用的具有高活性并且與cry1A類(lèi)基因無(wú)交互抗性的菌株為目的，依據(jù)與cry1A類(lèi)無(wú)交互抗性的cry基因序列，通過(guò)聚類(lèi)分析已知與cry1A類(lèi)基因無(wú)交互抗性的的基因設(shè)計(jì)了8對(duì)鑒定引物，通過(guò)PCR的方法鑒定了實(shí)驗(yàn)室保存的192株對(duì)鱗翅目具有高毒力的菌株，鑒定出了15株對(duì)鱗翅目具有高毒力的的菌株。對(duì)這15株菌株進(jìn)行質(zhì)粒圖譜分析，這15株菌株可分成8種類(lèi)型，對(duì)其基因型鑒定，包含的基因類(lèi)型有：cry1B、cry1C

3、、cry1D、cry1I、cry2A和cry9類(lèi)基因；電鏡觀察晶體形態(tài)包含：雙錐體形、方形、球形；SDS-PAGE分析其中一株既表達(dá)130 ku的蛋白又表達(dá)60ku左右的蛋白，一株同時(shí)表達(dá)130 ku和70 ku左右的蛋白，其余菌株均表達(dá)130 ku左右的蛋白并對(duì)胞晶混合物中的晶體蛋白含量進(jìn)行定量分析。選取了目前生產(chǎn)菌株KN11為對(duì)照，對(duì)這8株菌株進(jìn)行了甜菜夜蛾、小菜蛾、敏感棉鈴蟲(chóng)、Cry1Ac抗性棉鈴蟲(chóng)的的生物活性測(cè)定。這8株菌株對(duì)小

4、菜蛾均表現(xiàn)出較高的殺蟲(chóng)活性，其中菌株P(guān)S4-E12對(duì)小菜蛾的殺蟲(chóng)活性要比對(duì)照菌株KN11高近4倍；3株菌對(duì)甜菜夜蛾幼蟲(chóng)具有高毒力，其中菌株P(guān)S3-C2對(duì)甜菜夜蛾LC50值為1.87μg·mL-1；對(duì)敏感棉鈴蟲(chóng)具有高毒力的菌株4株(PS4-E12、PS1-F11、SCL-B3、PS8-B6)；初步篩選出對(duì)cry1Ac抗性棉鈴蟲(chóng)無(wú)交互抗性的菌株6株(PS3-C2、PS1-F11、SCL-B3、PS8-B6、PS4-E12、MO3-E5)，但