蘇云金芽孢桿菌高毒菌株菌種選育和制劑研究.pdf

1、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)是目前世界上公認(rèn)的最有效,應(yīng)用最廣泛的生物農(nóng)藥。Bt HD-1是一株應(yīng)用于生產(chǎn)的工業(yè)菌株,為獲得高毒的Bt菌株,本實(shí)驗(yàn)以HD-1為初始菌株,進(jìn)行了紫外,亞硝基胍,N+離子注入誘變,篩選出了對(duì)棉鈴蟲(chóng)高毒力的誘變菌株。
　　 確定了致死率75％時(shí)的最佳誘變條件分別為:(1)紫外照射時(shí)間7min,照射距離30cm。(2)亞硝基胍濃度為0.2mg/mL,反應(yīng)條件為30℃30m

2、in。(3)N+離子劑量為80×2.5×1013N/cm2,離子強(qiáng)度為10Kev。
　　 通過(guò)鏡檢和晶體蛋白含量的初篩和生物測(cè)定的復(fù)篩,篩選到了5株正突變最明顯的誘變菌株B47、B28、S159、B209和S218,這些菌株對(duì)棉鈴蟲(chóng)的毒力分別提升了87％,140％,87％,92％和100％。傳代實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,傳代10次后誘變菌株的晶體蛋白含量也未明顯下降。
　　 對(duì)這5株誘變菌株的菌落外觀和伴孢晶體形態(tài)進(jìn)行了觀察,發(fā)現(xiàn)菌

3、落外觀并無(wú)變化,伴孢晶體仍以菱形晶體為主,另有錐形、不規(guī)則和小體型晶體。分別對(duì)其晶體蛋白溶液進(jìn)行SDS-丙烯酰胺電泳,并對(duì)蛋白條帶進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,這幾株高毒誘變菌株的晶體蛋白分子量多為130kD和65kD。結(jié)合生物測(cè)定結(jié)果可以得出,此兩類蛋白均對(duì)棉鈴蟲(chóng)有毒力。從5株誘變菌株中挑出了提升最大的一株B28,按PB實(shí)驗(yàn)→最陡爬坡法→響應(yīng)曲面法的順序?qū)ζ湓及l(fā)酵培養(yǎng)基組分進(jìn)行優(yōu)化,得到了B28最佳培養(yǎng)基組分為:牛肉膏4.5g/L;蛋白胨1

4、0g/L;NaCl5.3g/L;葡萄糖3g/L;MgSO40.3g/L;K2HPO4.0.8g/L;MnSO40.05g/L。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,蘇云金芽孢桿菌B28的晶體蛋白的產(chǎn)量提高了57.8％。
　　 對(duì)Bt發(fā)酵液和阿維菌素復(fù)配懸浮劑的各類助劑:乳化劑,分散劑,增稠劑,載體,防凍劑,防腐劑等的種類和加入量進(jìn)行了篩選,根據(jù)懸浮液的理化性質(zhì)確定了最終的復(fù)配懸浮劑的配方:Bt發(fā)酵液80％、阿維菌素原粉2％、FS14％、木質(zhì)素磺酸鈉1％