蘇云金芽孢桿菌LLP29菌株的分離及其對白紋伊蚊作用機理的研究.pdf

1、本研究首次從苔蘚和植物葉片上分離獲得了多株蘇云金芽孢桿菌(Bt)野生菌株，并從白玉蘭葉片上分離篩選得到對蚊蟲有高效殺滅活性的LLP29 Bt菌株。為了解該新菌株的生物學特性，對其進行了形態(tài)學、基因型、蛋白等內容的研究。結果顯示，該新菌株對白紋伊蚊的LC<,50>為0．33 μg/mg。經PCR鑒定，該菌株的主要殺蚊基因為cytl基因，克隆和測序該新基因，國際命名委員會將其命名為cytlAa6基因。成功克隆表達該基因后將其蛋白純化，純化的

2、cytlAa6毒素蛋白對白紋伊蚊幼蟲及其細胞系C6/36細胞都有高效活性。 為了更好地利用該菌株及其毒性蛋白對白紋伊蚊進行生物防治，以白紋伊蚊敏感品系昆蟲及C6/36細胞為試驗研究對象，進行了作用機理的初步研究。免疫熒光染色和免疫組織化學實驗結果表明：CytlAa6毒素蛋白主要結合于C6/36細胞膜和白紋伊蚊幼蟲中腸上。據報道，Cytl在蚊蟲防治中能延緩高抗性的產生。然而本研究發(fā)現，用CytlAa6蛋白連續(xù)作用C6/36細胞10

3、代，抗性比達19.16。為了詮釋該新蛋白對C6/36細胞潛在的抗性機制，本研究進行了CytlAa6蛋白對敏感與抗性細胞的受體結合試驗。間接免疫熒光結果顯示，敏感細胞與FITC標記的抗體結合量明顯大于抗性細胞。ELISA試驗也得出類似結果：敏感細胞與CytlAa6毒素蛋白的結合力大于抗性細胞。由此可見，受體結合能力的下降是細胞產生抗性的根本原因。Western Blot免疫雜交結果表明，抗性細胞26 kD蛋白的缺失是導致細胞產生抗性的主要