痛瀉要方對IBS模型大鼠FOS蛋白表達的影響.pdf

1、目的：
　　1.IBS是一種以平滑肌功能失調、內臟高敏感性、腸道菌群失調作為重要臨床特征的慢性疾病。據(jù)報道歐美地區(qū)發(fā)病率為10％-20％,我國發(fā)病率為5％-12％。其發(fā)病原因復雜，罹及全身多臟器病變涉及腸道動力障礙、內臟感覺異常、腦腸軸紊亂、心理因素、腸道菌群失調，從而出現(xiàn)腹痛、腹脹、排便行為和大便性狀異常。多年來，IBS研究發(fā)展緩慢而不盡如人意。究其原因，IBS研究多采用急性應激動物模型，單純性地對胃腸動力和內臟感覺等進行癥狀化

2、地描述，這就在某種程度上阻礙了IBS治療學的發(fā)展。對于臨床研究的不足我們采用動物實驗來彌補，特別是有關倫理問題和隨后可能會出現(xiàn)偏倚的臨床研究。因此，表現(xiàn)直觀、可反復構建的IBS動物模型對進一步研究、了解IBS的易感因素、發(fā)病機制和疾病預防都有非常積極的作用。建立一個涉及消化道動力改變、感覺和行為異常等多因素同時存在的動物模型，不僅可以為探討這種疾病的發(fā)病機理創(chuàng)造有利條件，還可以驗證中樞神經系統(tǒng)在IBS發(fā)病中的意義。本研究采用中西醫(yī)結合的

3、方式構建一種新型IBS大鼠模型，目的為IBS這種臨床常見病的基礎研究提供更完善的動物模型。
　　2.對于IBS的治療，臨床上西醫(yī)無特效藥，治療方面，認為IBS癥狀是由鈣通道被異常的激活、增加的鈣內流導致的動作電位增多的結果，所以臨床采用鈣通道阻滯劑使病人癥狀緩解，但實際效果不盡人意。但中醫(yī)采用辯證的方法治療IBS具有深厚的歷史且效果明顯，但機制不清。本研究采用中醫(yī)治療泄瀉型IBS的經典方，即痛瀉要方，對IBS泄瀉型大鼠進行治療，闡

4、述中藥防治IBS的科學性和作用靶點，即中藥治療為身心同治，使大鼠的泄瀉癥狀有所緩解并且使大鼠的腦部海馬區(qū)FOS蛋白含量有所下降，可為IBS防治與藥物研發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.本研究采用已被廣泛應用的慢性輕度不可預見性應激的方法構建的經典IBS腹瀉型大鼠模型，即經典的抑郁模型。并根據(jù)呂紅、譚潔描述的方法進行整合，盡量模擬臨床IBS病因與發(fā)病癥狀，復合情志與證候多因素建立慢性多因素應激脾胃濕熱泄瀉型IBS大鼠模型。

5、慢性輕度不可預見性應激讓大鼠難以預料將會面臨何種刺激，而處于焦慮兼恐懼狀態(tài)；高糖高脂飼料、高溫高濕環(huán)境加酒精刺激，是較為成熟的脾胃濕熱造模方法。本實驗聯(lián)合上述兩種方法，運用中西醫(yī)結合的方式，制作新型IBS大鼠模型，這種大鼠模型可以較好地模擬人類脾胃濕熱腹瀉型IBS病因病機及發(fā)病癥狀。
　　2.本研究以痛瀉要方為治療藥，對泄瀉型IBS模型大鼠進行治療，對大鼠的腦、腸進行HE染色，對腦部情緒中樞海馬區(qū)進行免疫組化檢測，用平均光密度對免

6、疫組化結果進行統(tǒng)計，揭示痛瀉要方調控IBS模型大鼠腦部海馬區(qū)內FOS含量的影響，闡述中藥防治IBS的科學性和作用靶點。
　　3.本研究對治療后的大鼠腦部海馬區(qū)及結腸組織進行病理檢測及免疫組化檢測，發(fā)現(xiàn)IBS病理結果和正常組對比并無差異，說明IBS是一種功能性疾病并無器質性改變。另外IBS泄瀉型大鼠經中藥痛瀉要方治療后腦部海馬區(qū)FOS含量有所下降，說明痛瀉要方治療本病的作用靶點不只在腸部而且作用在腦，這與西醫(yī)一直以來認定的IBS病理

7、機制即腦-腸軸機制基本吻合。
　　結果：
　　1.本實驗在一定時間內綜合運用糞便性狀評分、痛閾與腸道敏感性、體重、行為/心理(敞箱實驗、糖水攝取量等)等檢測方法，獲得每只造模動物的5項指標。其中的各項指標與正常組比較，慢性輕度不可預見性應激模型組和慢性輕度不可預見性應激聯(lián)合脾胃濕熱動物模型組有顯著性統(tǒng)計學差異（P<0.01)；與慢性輕度不可預見性應激模型組比較，慢性輕度不可預見性應激聯(lián)合脾胃濕熱動物模型組有顯著統(tǒng)計學差異（P

8、<0.01)。
　　2.經統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，模型組與正常組比較，模型組各項指標如糞便性狀評分、痛閾與腸道敏感性、體重、行為、心理等，有顯著統(tǒng)計學差異（p<0.01)，痛瀉要方組和雙歧桿菌組差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05)；與模型組比較，痛瀉要方組及雙歧桿菌組體重有統(tǒng)計學差異（p<0.05)；與痛瀉要方組比較，雙歧桿菌組體重無統(tǒng)計學意義（p>0.05)。
　　3.通過大鼠的腦、腸進行HE染色，對腦部進行免疫組化檢測，平均光密度進行統(tǒng)計

9、發(fā)現(xiàn)，組與組之間差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），顯示痛瀉要方能降低海馬FOS表達，推測痛瀉要方對中樞FOS變化有調節(jié)作用。
　　結論：
　　1.本研究制作新型IBS大鼠模型，即慢性多因素應激脾胃濕熱泄瀉型IBS大鼠模型，能較好地模擬IBS的病因病機及臨床表現(xiàn)，該復合模型與人類脾胃濕熱泄瀉型IBS的病因病機及臨床表現(xiàn)，有較好的可重復性，并且可以持續(xù)數(shù)月?？捎糜谥嗅t(yī)、西醫(yī)基礎研究。
　　2.本研究中痛瀉要方在IBS治療

10、中注重疏肝健脾、心身同治，分別從癥狀、病機等角度入手，充分展示了IBS的情志病因和心身整體特征。當大鼠出現(xiàn)情志抑郁、焦慮、飲食減少、體質量減輕、倦怠乏力、排便次數(shù)增加及大便稀軟等癥狀表現(xiàn)時可能與海馬FOS表達升高有關。痛瀉要方能降低海馬FOS表達，推測痛瀉要方對中樞FOS變化有調節(jié)作用。中樞FOS的變化可能參與了IBS泄瀉型腦-腸互動機制。
　　3.本研究對腦部海馬區(qū)FOS蛋白表達進行免疫組化檢測，發(fā)現(xiàn)治療后大鼠海馬FOS蛋白表達