微囊藻毒素LR對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞c-jun、c-fos基因表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的：
　　微囊藻毒素(mircrocystins，MCs)是由水體中藍(lán)藻類所產(chǎn)生的具有生物活性的單環(huán)七肽化合物，具有多種同分異構(gòu)體，MC-LR是微囊藻毒素中毒性最強(qiáng)的一種。目前藍(lán)藻毒素家族中唯有微囊藻毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)評(píng)估為國際性的健康危險(xiǎn)因素，它廣泛分布在淡水湖泊及池塘水庫中，能導(dǎo)致急性肝損傷并且是活躍的促腫瘤因子，已經(jīng)被國內(nèi)外廣泛研究。肝腎是其主要的靶器官，目前，MCs引起的生殖毒性的研究報(bào)道還很少，且主要是

2、引起一些形態(tài)學(xué)及激素水平的改變。從細(xì)胞及基因水平研究MC-LR對(duì)雄性生殖器官的毒作用和機(jī)制的報(bào)道鮮有見到。本實(shí)驗(yàn)擬通過用MC-LR染毒原代SD大鼠睪丸支持細(xì)胞，探討MC-LR對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞的毒性作用及對(duì)細(xì)胞即刻早期應(yīng)答基因c-fos、c-jun基因和蛋白表達(dá)的影響，闡明MC-LR對(duì)支持細(xì)胞毒性作用可能的原理及機(jī)制。
　　方法：
　　在體外分離培養(yǎng)大鼠睪丸支持細(xì)胞，并用免疫熒光進(jìn)行鑒定。設(shè)置微囊藻毒素-LR藥物組(0.5n

3、M，5nM，50nM，500nM)和對(duì)照組(0nM)作用于原代支持細(xì)胞。通過分別用MC-LR作用于原代支持細(xì)胞24h和48h后MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖的情況確定合適的作用時(shí)間和有效作用濃度；用FCM法測(cè)定細(xì)胞的凋亡；用RT-PCR法檢測(cè)c-jun、c-fos mRNA表達(dá)；用Western-blot方法檢測(cè)c-jun、c-fos的蛋白表達(dá)。從而從細(xì)胞和基因水平分析MC-LR對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞毒性作用及對(duì)c-jun、C-fosmRNA及蛋白表

4、達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在MTT法中，微囊藻毒素-LR作用于睪丸支持細(xì)胞24h和48h后分別檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：作用24h時(shí)，低劑量組(0.5nM，5nM)與對(duì)照組(0nM)相比其活性無明顯變化，而高劑量組(50nM，500nM)的活性明顯下降，增殖減慢，且變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；作用48h時(shí)，低劑量組(0.5nM，5nM)與對(duì)照組(0nM)相比其活性無明顯變化，而高劑量組(50nM，500nM)的活性顯

5、著下降，變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且500 nM組差異有更顯著的變化(P<0.01)。遂選用高劑量組和對(duì)照組作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的作用時(shí)間，48h為作用濃度進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)高劑量組微囊藻毒素-LR能夠引起明顯的細(xì)胞凋亡，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，低劑量組變化則不顯著。RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示，高劑量組的支持細(xì)胞出現(xiàn)c-jun、c-fos基因表達(dá)上調(diào)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western-blot方法檢測(cè)到c-jun、c-